Thermo Scientific NanoDrop One Manuel De L'utilisateur page 215

Problèmes associés au blanc
• Il restait des résidus d'échantillon sur le socle ou dans la
cuvette avant la mesure du blanc. Les spectres d'échantillon
obtenus risquent de donner des valeurs d'absorbance
négatives, ce qui indique que l'absorbance du blanc était
supérieure à celle de l'échantillon dans cette région
du spectre.
• L'absorbance de la mesure de blanc est supérieure à celle de
l'échantillon inconnu à la longueur d'onde de l'analyse.
Si la composition du tampon utilisé comme blanc diffère
de celle de celui utilisé pour remettre en suspension
l'échantillon, les résultats de la mesure seront inexacts.
• On a utilisé par inadvertance l'échantillon pour faire le
blanc. Les spectres d'échantillon obtenus risquent de
donner des valeurs d'absorbance négatives ou, dans certains
cas, de ressembler à une image miroir d'un spectre d'acides
nucléiques ou des protéines purs typique comme dans
l'exemple ci-contre.
Solutions en cas de problèmes de blanc
• Nettoyez et/ou reconditionnez complètement les deux
socles, puis :
– exécutez de nouveau le cycle de blanc ; ou
– faites un nouveau blanc en utilisant une nouvelle
aliquote de la solution tampon appropriée, puis
mesurez une nouvelle aliquote de l'échantillon
inconnu.
• Pour la plupart des applications, faites le blanc en utilisant
la même solution tampon que celle utilisée pour remettre
en suspension l'analyte d'intérêt. La solution à blanc doit
être d'un pH et d'une force ionique similaires à ceux de la
solution d'analyte. Pour plus détails, reportez-vous à
« Mesurer des échantillons » dans l'application utilisée.
• Si les problèmes de blanc persistent, utilisez une application
susceptible d'être plus appropriée comme une analyse de
fluorescence en utilisant le NanoDrop 3300 ou un dosage
colorimétrique si vous mesurez des protéines.
Thermo Scientific
Préparer les échantillons et les blancs
La solution d'échantillon de protéines utilisée
pour faire le blanc donne un spectre « image
miroir »
Manuel de l'utilisateur du NanoDrop One
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