Nettoyage Et Soin; Matériaux Nécessaires Et Recettes - 3B 1012852 Mode D'emploi

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Nettoyage et soin

Attention: Déconnecter la cuve d'électrophorèse de l'unité de courant avant le nettoyage.
Il convient de nettoyer la cuve d'électrophorèse et les peignes après chaque utilisation avec de l'eau tiède. Si nécessaire, y
ajouter un peu de liquide vaisselle. Ne pas utiliser des brosses à vaisselle, pour éviter l'endommagement des électrodes de
platine. Le lavage de la cuve d'électrophorèse peut se faire avec de l'eau distillée ou décalcifiée afin d'éviter la formation de
calcaire).
Ne jamais laisser la cuve d'électrophorèse crasseuse pendant des heures, voire pendant toute une nuit. Il peut se former des
traces de saleté résultant des restes du gel ou du tampon séché, qui seront difficiles à enlever.
Attention: Si possible, tenir les connexions électriques à l'écart de l'eau. En cas de contact avec de l'eau, les essuyer soigneuse-
ment avec un torchon doux ou les laisser sécher à l'air. Ne pas utiliser de papier, qui se révèle souvent être trop dur et pourrait
alors causer des égratignures. Ne pas non plus sécher au sèche-cheveux; l'air chaud peut détériorer les connexions, les vissa-
ges et le matériel acrylique.
Attention: N'utiliser pour le nettoyage ni de l'éthanol, ni d'autres solvants organiques. Ceux-ci peuvent créer des fissures, des
brisures ou d'autres transformations du matériel indésirables.
Matériaux nécessaires et recettes
Tampon de l'électrophorèse
Le tampon d'électrophorèse mobilise les ions nécessaires pour le processus de l'électrophorèse et provoque un pH constant,
pour que les acides nucléiques comportent la charge nette voulue. Les acides nucléiques sont chargés négativement dans un
milieu basique à neutre. Normalement, les tampons d'électrophorèse contiennent des composantes qui préservent les acides
nucléiques de dégradation, par exemple l'EDTA qui complexe les cations divalents et inhibite les ADNases.
Ici, il est question du tampon TAE courant pour l'électrophorèse d'ADN sous des conditions non-dénaturantes.
TAE désigne Tris, Acétate, EDTA.
Le tampon peut être préparé indépendamment ou bien être commandé auprès de 3B Scientific comme concentré de tampon.
Agarose, volume et concentration de gel
Bien qu'il existe des agaroses différents, la plus grande importance est mise sur le compte de l'agarose standard. Pour couler
le gel d'agarose dans la cuve présente, 40 ml de dissolution de gel sont nécessaires. Il est recommandable de préparer un petit
peu plus de dissolution de gel, parce qu'il y a toujours un dépôt restant dans la cuve de préparation. Cela dépend de la con-
centration d'agarose dans le gel, les molécules de taille différentes sont séparées de façon optimale, comme exposé dans le
tableau ci-dessous.
Pouvoir de séparation optimal d'ADN linéaire, double brin, selon la concentration d'agarose du gel.
Concentration d'agarose (%) Agarose (g)
0,5
0,7
1,0
1,2
1,5
2,0
Tampon de charge du gel
Les échantillons à analyser sont mélangés avec un tampon de charge du gel approprié avant l'application du gel. Ces tampons
de charge du gel contiennent non seulement des colorants pour rendre perceptible à la vue le processus de la séparation,
mais aussi de la glycérine, saccharose et d'autres éléments semblables pour que les échantillons deviennent plus lourds que
le tampon d'électrophorèse et baissent facilement dans les poches de gel pendant l'application des échantillons. Souvent,
le bleu de bromophénol ou xylène cyanole en qualité de colorants sont employés dans les tampons de charge du gel. Les
facteurs affectant la migration des fragments d'ADN double brin sont le type d'agarose, la concentration du gel et le tampon
d'électrophorèse.
Tampon (ml)
0,25 50
0,35 50
0,5 50
0,6 50
0,75 50
1,0 50
®
Gamme de tailles idéales (kbp)
1 – 15
0,8 – 10
0,5 – 7
0,3 – 6
0,2 – 4
0,1 – 3