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3B 1012852 Mode D'emploi

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Sommaire des Matières pour 3B 1012852

  • Page 1 1012852 (W19925)
  • Page 3 If you need only short runs are needed, you can use both combs which then gives twice as many slots for samples. Warranty The manufacturer guarantees that the electrophoresis chamber was completely tested before delivery and that it complies with the applicable safety regulations. Please check the delivery immediately upon receipt for completeness and possible damage in transit. If anything is faulty or damaged, please contact 3B Scientific immediately. The manufacturer gives a 24-month warranty on the product conditional on the chamber being used according to the instruc- tion manual. Claims for replacement or repair are not valid if physical abuse is the reason for the damage. Any liability for conseqential damages resulting from the use of the electrophoresis chamber is hereby excluded. The manufacturer‘s liability for intent and gross negligence or for damages resulting from injury to life, body or health is unaffected by that. Our experience shows the two platinum electrodes last for many years if the product is used properly. Any Damage occur- ring is usually due to mechanical errors (e. g. by washing-up brushes) or contact with so-called “platinum poisons” such...
  • Page 4 English that you need. To dissolve the agarose, heat the Erlenmeyer flask either in a microwave or with a heating stirrer. For the latter, use medium heating power and stir constantly. Heating in a microwave should only be for short periods of time, on medium heating level, repeated multiple times. When heating in a microwave, remove the Erlenmeyer flask from time to time (remember to wear gloves, goggles and be careful to avoid boiling!) and gently swirl the gel solution in a circle. Put it back in the microwave afterwards and repeat the entire process 3-4 times, until the agarose is completely dissolved. 4. B efore the casting of the gel, allow the gel solution to cool down to 60°C. Cast the gel solution without any air bubbles in the gap between the two white plastic stripes on the chamber’s ground (its capacity is about 40 ml). Then insert the comb (or both combs respectively). Make sure that there are no air bubbles on the edges of the slots. Gels made of standard aga- rose solidify within 20 minutes at room temperature. 5. A fter the solidification of the agarose gel, add some of the electrophoresis buffer in 3-mm layers in the chamber over the gel to prevent i from drying out. After carefully removing the comb(s), the gel can now be loaded, The coated gel can be stored for a few days at 4°C. For best results leave the comb inserted and cover the gel with wrapping film to protect it from drying out. Loading of gels and electrophoresis 1. A fter the solidification of the agarose gel, cover the gel with the electrophoresis buffer. Please note the maximum filling level for the electrophoresis buffer. 2. Remove the comb(s) from the agarose gel by gently moving back and forth and then carefully pulling out upright. 3. I n the next step, the slots in the gel can be loaded with the samples. Preparing the samples with an appropriate gel loading buffer which increases the specific weight of the samples makes it easier to pour them into the slots with a micropipette (see section “gel loading buffer”). 4. W hen loading the gel slots, dip the tip of the micropipette carefully into the slot and then slowly press out the sample. Make sure not to damage the bottom of the slot.

  • Page 5: Cleaning And Maintenance

    Required Material and Processes Electrophoresis buffer The electrophoresis buffer provides the necessary ions for the electrophoresis process. It’s addition provides a constant pH value so that nucleic acids have the desired net charge. Nucleic acids are negatively charged in an alkaline up to neutral medi- um. Normally, electrophoresis buffer contains components that protect nucleic acids from degradation, e.g. EDTA, which com- plexes divalent cations and therefore inhibits DNases. ® At this point, the frequently used TAE electrophoresis buffer for electrophoresis of DNA is described for non-denaturing con- ditions. TAE stands for Tris-acetate-EDTA. You can either produce the buffer yourself or order it from 3B Scientific as a buffer concentrate Agarose, gel volumes and gel concentrations Even though various agaroses are offered, the so called standard agarose is certainly of prime importance. For the casting of an agarose gel in this chamber about 40 ml of gel solution is needed. Please prepare a little extra gel solution to allow for the fact that small residues always remain in the vessel. Optimal separation of molecules of different sizes will be achieved by varying the concentration of the gel according to the information in the chart below.

  • Page 6: Declaration Of Conformity

    English DNA length standard For the sizing of the samples, apply one DNA size standard on each gel at least to one lane. DNA size markes are made of DNA fragments of familiar sizes. Staining of nucleic acids Since there are different methods of staining nucleic acids, we refer at this point to the corresponding technical literature (Sambrook et. al., 1989). Declaration of Conformity The electrophoresis chamber ’Mini’ complies with the applicable security requirements according to EN: 50081-1 (1992) and EN: 50082-1 (1992). Literature Ausubel, Frederik M. et al. (Ed.), (2005). Short Protocols in Molecular Biology, A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. Wiley-VCH, Hoboken. Knippers, R. (2008). Molekulare Genetik. Thieme Verlag, Stuttgart. Sambrook J, Fritsch E.F. Maniatis T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.

  • Page 7: Lieferumfang

    Der Hersteller garantiert, dass die Elektrophoresekammer vor der Auslieferung genau geprüft wurde und den geltenden Sicherheitsstandards entspricht. Bitte überprüfen Sie die Lieferung sofort nach Erhalt auf Vollständigkeit und evtl. Transportschäden. Sollte die Lieferung feh- lerhaft oder beschädigt sein, wenden Sie sich umgehend an 3B Scientific. Auf die Elektrophoresekammer gewährt der Hersteller 24 Monate Garantie, sofern die Kammer gemäß der Bedienungsan- leitung eingesetzt wurde. Ansprüche auf kostenlosen Ersatz oder Reparatur bestehen nicht, falls eine falsche Handhabung vorliegt. Eine Haftung für Folgeschäden, die aus einer grob fahrlässigen oder vorsätzlich falschen Verwendung der Elek-...
  • Page 8 Deutsch 3. F ür das Ansetzen der Gellösung dürfen nur geeignete Agarosen und entsprechende Elektrophoresepuffer eingesetzt wer- den. Für die Herstellung der Agarosegellösung wird eine entsprechende Menge Agarose in einem kleinen Erlenmeyerkolben abgewogen, eine geeignete Menge Elektrophoresepuffer dazugegossen und ein Rührfisch (Erhitzen mit Heizrührer) hin- zugegeben. Das Gewicht des befüllten Erlenmeyerkolbens wird festgehalten, so dass auftretende Kochverluste durch Verdampfen durch Zugabe von destilliertem H2O ausgeglichen werden können. So hat die Gellösung tatsächlich die vor- gesehene Agarosekonzentration. Zum Lösen der Agarose wird der Erlenmeyerkolben entweder in die Mikrowelle gestellt oder der Erlenmeyerkolben auf einer Heizplatte unter Rühren und bei mittlerer Heizleistung erhitzt. Die Erhitzung in der...

  • Page 9: Reinigung Und Pflege

    Nukleinsäuren die gewünschte Nettoladung aufweisen. Nukleinsäuren sind im alkalischen bis neutralen Milieu ® negativ geladen. In der Regel beinhalten Elektrophoresepuffer auch Komponenten, die die Nukleinsäuren vor Degradierung schützen, z.B. EDTA, welches zweiwertige Kationen komplexiert und dadurch DNasen inhibiert. An dieser Stelle wird der gängige Elektrophoresepuffer TAE für Elektrophorese von DNA unter nicht-denaturierenden Bedingungen beschrieben. TAE steht für Tris-Acetat-EDTA. Den Puffer können Sie entweder selbst herstellen oder aber z.B. bei 3B Scientific als Fertig-Pufferkonzentrat beziehen. Agarose, Gelvolumen und Gelkonzentrationen Obgleich verschiedene Agarosen angeboten werden, hat die sog. Standard-Agarose sicherlich die größte Bedeutung. Für das Gießen eines Agarosegels in der vorliegenden Kammer wird ca. 40 ml Gellösung benötigt. Bitte etwas mehr Gellösung herstel- len, da immer ein Rest im Ansatzgefäß verbleibt. Je nach Agarosegehalt des Gels werden Moleküle unterschiedlicher Größenbereiche optimal aufgetrennt, die in der unten ste- henden Tabelle aufgeführt sind.

  • Page 10: Konformitätserklärung

    Deutsch DNA-Längenstandard Ein DNA-Längenstandard wird auf jedem Gel mindestens in eine Spur aufgetragen, um eine Größenbestimmung der Proben vernehmen zu können. DNA-Längenmarker bestehen aus DNA-Fragmenten bekannter Größe. Anfärbung von Nukleinsäuren Da es verschiedene Möglichkeiten der Anfärbung von Nukleinsäuren gibt, wird an dieser Stelle auf die einschlägige Fachliteratur verwiesen (Sambrock et. al., 1989). Konformitätserklärung Die Elektrophoresekammer „Mini“ entspricht den grundlegenden Sicherheitsanforderungen gemäß EN: 50081-1 (1992) und EN: 50082-1 (1992). Literatur Ausubel, Frederik M. et al. (Ed.), (2005). Short Protocols in Molecular Biology, A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. Wiley-VCH, Hoboken.

  • Page 11: Contenu De La Livraison

    Pour toutes manipulations précitées, veillez à ne pas utiliser un rayonnement UV d’une longueur d’onde supérieure à 300 nm. Un rayonnement UV dur (<300 nm de longueur d’onde) porte atteinte à la cuve, au gel et aux acides nucléiques. S’il s’agit uniquement de distances d’isolement courtes, il est possible d’utiliser les deux positions des peignes. Il y aura deux fois plus de poches d’essai à votre disposition. Garantie Le fabricant garantit le recollage fidèle de la cuve d’électrophorèse avant la livraison et l’adéquation aux standards de sécu- rité en vigueur. Lors la réception, veuillez vérifier l’intégralité et l’intégrité de la livraison. Dans le cas d’une livraison défec- tueuse ou endommagée, veuillez contacter immédiatement le service de réclamation de 3B Scientific. Le fabricant accorde une garantie de 24 mois pour la cuve à électrophorèse, dans la mesure où la cuve est utilisée confor- mément au mode d’emploi. Le produit ne sera pas remplacé ou réparé gratuitement s’il fait l’objet d’une utilisation non- conforme. Le fabricant ne pourra en aucun être tenu pour responsable des éventuels dommages résultant d’une utilisation non-conforme de la cuve à électrophorèse. La responsabilité du fabricant ne pourra être engagée ni en cas de négligence grave ou intentionnelle, ni pour des dommages résultant d’une atteinte à la vie, au corps ou à la santé.
  • Page 12 Français 2. Enlever avec précaution le bouchon de sécurité de la cuve d’électrophorèse. 3. P our la préparation de la dissolution de gel, seule l’utilisation d’agaroses appropriés et de tampons d’électrophorèse con- formes est recommandée. Pour la production de la dissolution de gel d’agarose, peser la quantité d’agarose correspondante dans une petite fiole Erlenmeyer, ajouter suffisamment du tampon d’électrophorèse et un agitateur chauffant. Noter le poids de la fiole Erlenmeyer remplie, pour que des pertes, dues à l’ébullition, puissent être compensées par l’ajout de H2O (distillé). De cette façon, la dissolution du gel comporte la concentration d’agarose prévue. Pour dissoudre complètement l’agarose, placer l’Erlenmeyer au four à micro-ondes ou alternativement faire chauffer l’Erlenmeyer sur une plaque chauffante à chaleur moyenne, en agitant de temps en temps. L’échauffement dans le four à micro-ondes devrait être d’une courte durée, mais doit être refait plusieurs fois. Entre temps, puiser l’Erlenmeyer (Attention: porter des gants de sécurité, des lunettes protec- trices et faire attention au retard à l’ébullition éventuelle) et agiter circulairement la dissolution de gel. Puis remettre dans le four à micro-ondes et refaire tout le processus 3-4 fois jusqu’à que l’agarose soit totalement dissout. 4. A vant de couler le gel, laisser refroidir la dissolution de gel en dessous de 60°C. Puis couler la dissolution de gel dans la niche se trouvant entre les deux bâtons plastifiés blancs sur le fond de la cuve, sans produire de bulles (capacité: environ 40 ml). Puis, utiliser le peigne (ou les deux peignes). Faire attention qu’il n’y ait pas de bulles aux marges de la niche. Les gels d’agarose standard figent à température ambiante dans un temps de 20 minutes environ. 5. R ecouvrir le gel d’agarose figé de 3mm du tampon d’électrophorèse, pour qu’il ne s’assèche pas. Retirer soigneusement le peigne, puis charger le gel. Le gel emballé dans du tampon peut être conservé pendant plusieurs jours, au mieux avec le peigne placé, avant qu’il ne perde trop d’eau par évaporation (couvrir de film alimentaire). Chargement des gels d’agarose et de l’électrophorèse 1. L e gel d’agarose complètement figé est à recouvrir avec du tampon d’électrophorèse jusqu’’à ce que la hauteur de remplis- sage maximale du tampon („Fill Line“) soit atteinte.

  • Page 13: Nettoyage Et Soin

    Tampon de l’électrophorèse Le tampon d’électrophorèse mobilise les ions nécessaires pour le processus de l’électrophorèse et provoque un pH constant, pour que les acides nucléiques comportent la charge nette voulue. Les acides nucléiques sont chargés négativement dans un milieu basique à neutre. Normalement, les tampons d’électrophorèse contiennent des composantes qui préservent les acides ® nucléiques de dégradation, par exemple l’EDTA qui complexe les cations divalents et inhibite les ADNases. Ici, il est question du tampon TAE courant pour l’électrophorèse d’ADN sous des conditions non-dénaturantes. TAE désigne Tris, Acétate, EDTA. Le tampon peut être préparé indépendamment ou bien être commandé auprès de 3B Scientific comme concentré de tampon. Agarose, volume et concentration de gel Bien qu’il existe des agaroses différents, la plus grande importance est mise sur le compte de l’agarose standard. Pour couler le gel d’agarose dans la cuve présente, 40 ml de dissolution de gel sont nécessaires. Il est recommandable de préparer un petit peu plus de dissolution de gel, parce qu’il y a toujours un dépôt restant dans la cuve de préparation. Cela dépend de la con- centration d’agarose dans le gel, les molécules de taille différentes sont séparées de façon optimale, comme exposé dans le tableau ci-dessous. Pouvoir de séparation optimal d’ADN linéaire, double brin, selon la concentration d’agarose du gel. Concentration d’agarose (%) Agarose (g) Tampon (ml) Gamme de tailles idéales (kbp)
  • Page 14 Français L’échelle de marqueur de taille moléculaire Une échelle de marqueur de taille d’ADN est appliquée sur chaque gel au moins sur une trace, pour pouvoir mesurer les échantil- lons. Ces marqueurs de taille d’ADN consistent en fragments d’ADN de taille connue. Coloration des acides nucléiques Da es verschiedene Möglichkeiten der Anfärbung von Nukleinsäuren gibt, wird an dieser Stelle auf die einschlägige Fachliteratur verwiesen (Sambrock et. al., 1989). Konformitätserklärung Comme il y a des méthodes différentes de coloration des acides nucléiques, nous attirons votre attention sur la littérature spécia- lisée correspondante (Sambrock et. al., 1989). Littérature Ausubel, Frederik M. et al. (Ed.), (2005). Short Protocols in Molecular Biology, A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. Wiley-VCH. Knippers, R. (2008). Molekulare Genetik, Thieme Verlag, Stuttgart. Sambrook, J, Fritsc, E.F., Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York. ®...
  • Page 16 ®...

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