3B 1012852 Mode D'emploi
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Sommaire des Matières pour 3B 1012852
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Page 11: Contenu De La Livraison
Pour toutes manipulations précitées, veillez à ne pas utiliser un rayonnement UV d’une longueur d’onde supérieure à 300 nm. Un rayonnement UV dur (<300 nm de longueur d’onde) porte atteinte à la cuve, au gel et aux acides nucléiques. S’il s’agit uniquement de distances d’isolement courtes, il est possible d’utiliser les deux positions des peignes. Il y aura deux fois plus de poches d’essai à votre disposition. Garantie Le fabricant garantit le recollage fidèle de la cuve d’électrophorèse avant la livraison et l’adéquation aux standards de sécu- rité en vigueur. Lors la réception, veuillez vérifier l’intégralité et l’intégrité de la livraison. Dans le cas d’une livraison défec- tueuse ou endommagée, veuillez contacter immédiatement le service de réclamation de 3B Scientific. Le fabricant accorde une garantie de 24 mois pour la cuve à électrophorèse, dans la mesure où la cuve est utilisée confor- mément au mode d’emploi. Le produit ne sera pas remplacé ou réparé gratuitement s’il fait l’objet d’une utilisation non- conforme. Le fabricant ne pourra en aucun être tenu pour responsable des éventuels dommages résultant d’une utilisation non-conforme de la cuve à électrophorèse. La responsabilité du fabricant ne pourra être engagée ni en cas de négligence grave ou intentionnelle, ni pour des dommages résultant d’une atteinte à la vie, au corps ou à la santé. - Page 12 Français 2. Enlever avec précaution le bouchon de sécurité de la cuve d’électrophorèse. 3. P our la préparation de la dissolution de gel, seule l’utilisation d’agaroses appropriés et de tampons d’électrophorèse con- formes est recommandée. Pour la production de la dissolution de gel d’agarose, peser la quantité d’agarose correspondante dans une petite fiole Erlenmeyer, ajouter suffisamment du tampon d’électrophorèse et un agitateur chauffant. Noter le poids de la fiole Erlenmeyer remplie, pour que des pertes, dues à l’ébullition, puissent être compensées par l’ajout de H2O (distillé). De cette façon, la dissolution du gel comporte la concentration d’agarose prévue. Pour dissoudre complètement l’agarose, placer l’Erlenmeyer au four à micro-ondes ou alternativement faire chauffer l’Erlenmeyer sur une plaque chauffante à chaleur moyenne, en agitant de temps en temps. L’échauffement dans le four à micro-ondes devrait être d’une courte durée, mais doit être refait plusieurs fois. Entre temps, puiser l’Erlenmeyer (Attention: porter des gants de sécurité, des lunettes protec- trices et faire attention au retard à l’ébullition éventuelle) et agiter circulairement la dissolution de gel. Puis remettre dans le four à micro-ondes et refaire tout le processus 3-4 fois jusqu’à que l’agarose soit totalement dissout. 4. A vant de couler le gel, laisser refroidir la dissolution de gel en dessous de 60°C. Puis couler la dissolution de gel dans la niche se trouvant entre les deux bâtons plastifiés blancs sur le fond de la cuve, sans produire de bulles (capacité: environ 40 ml). Puis, utiliser le peigne (ou les deux peignes). Faire attention qu’il n’y ait pas de bulles aux marges de la niche. Les gels d’agarose standard figent à température ambiante dans un temps de 20 minutes environ. 5. R ecouvrir le gel d’agarose figé de 3mm du tampon d’électrophorèse, pour qu’il ne s’assèche pas. Retirer soigneusement le peigne, puis charger le gel. Le gel emballé dans du tampon peut être conservé pendant plusieurs jours, au mieux avec le peigne placé, avant qu’il ne perde trop d’eau par évaporation (couvrir de film alimentaire). Chargement des gels d’agarose et de l’électrophorèse 1. L e gel d’agarose complètement figé est à recouvrir avec du tampon d’électrophorèse jusqu’’à ce que la hauteur de remplis- sage maximale du tampon („Fill Line“) soit atteinte.
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Page 13: Nettoyage Et Soin
Tampon de l’électrophorèse Le tampon d’électrophorèse mobilise les ions nécessaires pour le processus de l’électrophorèse et provoque un pH constant, pour que les acides nucléiques comportent la charge nette voulue. Les acides nucléiques sont chargés négativement dans un milieu basique à neutre. Normalement, les tampons d’électrophorèse contiennent des composantes qui préservent les acides ® nucléiques de dégradation, par exemple l’EDTA qui complexe les cations divalents et inhibite les ADNases. Ici, il est question du tampon TAE courant pour l’électrophorèse d’ADN sous des conditions non-dénaturantes. TAE désigne Tris, Acétate, EDTA. Le tampon peut être préparé indépendamment ou bien être commandé auprès de 3B Scientific comme concentré de tampon. Agarose, volume et concentration de gel Bien qu’il existe des agaroses différents, la plus grande importance est mise sur le compte de l’agarose standard. Pour couler le gel d’agarose dans la cuve présente, 40 ml de dissolution de gel sont nécessaires. Il est recommandable de préparer un petit peu plus de dissolution de gel, parce qu’il y a toujours un dépôt restant dans la cuve de préparation. Cela dépend de la con- centration d’agarose dans le gel, les molécules de taille différentes sont séparées de façon optimale, comme exposé dans le tableau ci-dessous. Pouvoir de séparation optimal d’ADN linéaire, double brin, selon la concentration d’agarose du gel. Concentration d’agarose (%) Agarose (g) Tampon (ml) Gamme de tailles idéales (kbp) - Page 14 Français L’échelle de marqueur de taille moléculaire Une échelle de marqueur de taille d’ADN est appliquée sur chaque gel au moins sur une trace, pour pouvoir mesurer les échantil- lons. Ces marqueurs de taille d’ADN consistent en fragments d’ADN de taille connue. Coloration des acides nucléiques Da es verschiedene Möglichkeiten der Anfärbung von Nukleinsäuren gibt, wird an dieser Stelle auf die einschlägige Fachliteratur verwiesen (Sambrock et. al., 1989). Konformitätserklärung Comme il y a des méthodes différentes de coloration des acides nucléiques, nous attirons votre attention sur la littérature spécia- lisée correspondante (Sambrock et. al., 1989). Littérature Ausubel, Frederik M. et al. (Ed.), (2005). Short Protocols in Molecular Biology, A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology. Wiley-VCH. Knippers, R. (2008). Molekulare Genetik, Thieme Verlag, Stuttgart. Sambrook, J, Fritsc, E.F., Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York. ®...
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