Table des Matières
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11. DÉPANNAGE
Problème et raison
AUCUNE PRODUCTION
D'ADN OU FAIBLE
PRODUCTION D'ADN
Lyse incomplète
Réactifs non appliqués
de manière appropriée
Élution sous-optimale
de l'ADN depuis la colonne
COLONNES BOUCHÉES
Lyse incomplète
!
Réactifs non appliqués
de manière appropriée
PERFORMANCE SOUS-
OPTIMALE DE L'ADN
DANS LES RÉACTIONS
ENZYMATIQUES
Transfert d'éthanol ou de sel
Contamination de l'ADN avec
des substances inhibitrices
Kit d'extraction d'ADN oCheck
- Instructions d'utilisation
®
Révision 00 / Février 2011
Commentaires et suggestions
• Échantillon non soigneusement homogénéisé et mélangé avec le tampon L1 /
la protéinase K. Le mélange doit être vigoureusement mélangé avec un vortex
immédiatement après l'ajout de tampon L1.
• Nombre insuffisant de cellules dans l'échantillon.
• Activité de la protéinase K diminuée : diviser la solution en aliquotes et conserver à
-20 ºC pendant une durée maximale de 6 mois. Ne pas recongeler.
• Préparer les tampons L4 et W2, l'ARN porteur et la solution de protéinase K
conformément à la section 8.1 ou 10.1. Ajouter de l'éthanol aux lysats avant de les
charger sur les colonnes.
• Préchauffer le tampon E à 70 °C avant élution. Appliquer le tampon E directement
au centre de la membrane de silice.
• L'efficacité de l'élution diminue considérablement si celle-ci est réalisée avec des
tampons dont le pH est < 7.0. Utiliser des tampons d'élution légèrement alcalins tels
que le tampon E (pH 8,5).
• Échantillon non soigneusement homogénéisé et mélangé avec le tampon L1 /
la protéinase K. Le mélange doit être vigoureusement mélangé avec un vortex
immédiatement après l'ajout de tampon L1.
• Activité de la protéinase K diminuée : diviser la solution en aliquotes et conserver à
–20 °C pendant une durée maximale de 6 mois. Ne pas recongeler.
• Préparer les tampons L4 et W2, l'ARN porteur et la solution de protéinase K
conformément à la section 8.1 ou 10.1. Ajouter de l'éthanol aux lysats avant de les
charger sur les colonnes.
• S'assurer de centrifuger au moins 1 minute à 11 000 g afin d'éliminer la totalité du
tampon W2 à base d'éthanol avant l'élution de l'ADN. Si, pour quelque raison que
ce soit, le niveau du tampon W2 a touché la sortie de la colonne après le séchage,
répéter la centrifugation.
• Ne pas refroidir le tampon W2 avant l'emploi. Un tampon froid n'élimine pas le sel de
manière efficace. Équilibrer le tampon W2 à température ambiante avant l'emploi.
• Ne pas éluer l'ADN avec le tampon TE. L'EDTA peut inhiber les réactions
enzymatiques. Repurifier l'ADN et l'éluer dans le tampon E.
• Si le rapport A260/280 de l'éluat est inférieur à 1,6, répéter la procédure de
purification : ajouter 1 volume de tampon L4 plus 1 volume d'éthanol (de 96 à
100 %) à l'éluat. Charger le mélange sur une colonne et procéder à l'étape de
fixation de l'ADN (section 8.3.5 ou 10.3.5) du protocole standard.
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