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Kit d'extraction d'ADN oCheck
Notice d'utilisation
Préparation en colonne unitaire (réf. 515 040)
Préparation en barrettes de 8 colonnes (réf. 515 050)
Pour usage diagnostic in-vitro par le personnel
de laboratoire qualifié exclusivement
Greiner Bio-One GmbH
Maybachstr. 2 • 72636 Frickenhausen • Allemagne
Téléphone : +49 (0) 7022 948-0 • Télécopie +49 (0) 7022 948-514
info@de.gbo.com • www.gbo.com/bioscience
®
Révision 00 / Février 2011
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Table des Matières
Manuels Connexes pour Greiner Bio-One ADN oCheck
Sommaire des Matières pour Greiner Bio-One ADN oCheck
- Page 1 Kit d'extraction d'ADN oCheck ® Notice d'utilisation Préparation en colonne unitaire (réf. 515 040) Préparation en barrettes de 8 colonnes (réf. 515 050) Pour usage diagnostic in-vitro par le personnel de laboratoire qualifié exclusivement Révision 00 / Février 2011 Greiner Bio-One GmbH Maybachstr.
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Page 2: Explication Des Symboles
In vitro Sıcaklık İçeriği Tahriş Parti kodu Önemli ullanmayın kullanma dan önce numarası firma diagnostik sınırlaması <n> test edici tarihi: talimatı tıbbi tanı için yeter- okuyun ürünü lidir Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ® Révision 00 / Février 2011... -
Page 3: Table Des Matières
Ajustement des conditions de fixation de l'ADN ..............17 8.3.5 Fixation de l'ADN ........................18 8.3.6 Lavage des colonnes ......................18 8.3.7 Séchage des colonnes ....................18 8.3.8 Élution de l'ADN .........................19 Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ® Révision 00 / Février 2011... - Page 4 14. PROTOCOLES RÉSUMÉS ..................14.1 Protocole résumé pour préparation en colonne unitaire (réf. 515 040) ......... 35 14.2 Protocole résumé pour préparation en barrettes de 8 colonnes (réf. 515 050)..... 37 Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ® Révision 00 / Février 2011...
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Page 5: Composition Du Kit
Colonnes Spin Columns Tubes collecteurs Collection Tubes Barrettes de colonnes Binding Strips Feuille de papier Paper Sheet Étiquette pour tampon L4 Instructions de téléchargement du mode d'emploi Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ® Révision 00 / Février 2011... -
Page 6: Consommables Et Équipement Requis
2. CONSOMMABLES ET ÉQUIPEMENT REQUIS Préparation avec une colonne unitaire (réf. 515 040) Consommables Réf. Greiner Bio-One Quantité (unités) Kit d'extraction d'ADN oCheck – ® 515 040 50 préparations Préparation en colonne unitaire Pointes à filtre stériles exempt DNase pour micropipettes Pointes à... -
Page 7: Préparation En Barrettes De 8 Colonnes (Réf. 515 050)
Préparation en barrettes de 8 colonnes (réf. 515 050) Consommables Réf. Greiner Bio-One Quantité (unités) Kit d'extraction d'ADN oCheck – ® 515 050 12 x 8 préparations Préparation en barrette de 8 colonnes Pointes à filtre stériles exempt DNase pour micropipettes 765 288 Pointes à... -
Page 8: Expédition Et Stockage
3. EXPÉDITION ET STOCKAGE Le stockage et l'expédition du kit d'extraction d'ADN oCheck ont lieu à température ambiante. ® Pour le stockage des solutions de travail préparées, consulter les sections 8.1 et 10.1. 4. CONSIGNES DE SÉCURITÉ Les composants suivants du kit d'extraction d'ADN oCheck contiennent des substances dangereuses. -
Page 9: Élimination Des Déchets
être totalement exclue. Dès lors, les déchets liquides doivent être considérés comme infectieux et manipulés et éliminés conformément aux règlements de sécurité locaux. Respecter scrupuleusement les directives fédérales, nationales et locales relatives à l'élimination des déchets. Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ®... -
Page 10: Introduction
à préparer l’ADN d’échantillons humains avant analyse à l'aide des systèmes d’essai de la gamme de produits oCheck ® La méthode utilisée pour isoler l'acide nucléique à partir du kit d'extraction d'ADN oCheck produit ® un ADN adapté à l'analyse directe. Le Kit d’extraction d’ADN oCheck est disponible en plusieurs ®... -
Page 11: Matériel De Prélèvement
(Greiner Bio-One ; réf. 465 060) et PapilloCheck high- ® ® risk (Greiner Bio-One ; réf. 505 060), le kit d'extraction d'ADN oCheck a été conçu et testé pour ® extraire de l'ADN génomique humain et de l'ADN viral depuis des frottis du col de l'utérus humains recueillis à... -
Page 12: Conditions Generales De Travail Avec Ocheck
œuvre les techniques de pointe actuellement utilisées en biologie moléculaire, et elles visent à garantir une sécurité maximale pour les méthodes à base de PCR. Des précautions raisonnables doivent être prises lors de l'utilisation du kit d'extraction d'ADN oCheck en association avec une analyse de la ®... -
Page 13: Avertissements Et Précautions
Toute la procédure d'extraction d'ADN à l'aide du kit d'extraction d'ADN oCheck doit être réalisée ® dans la salle 1, salle d'extraction d'ADN. Après avoir quitté cette salle, il faut changer de blouse. Dans le déroulement des travaux avec oCheck , l'extraction d'ADN est le processus le plus sensible ®... -
Page 14: Travailler En Toute Sécurité
Toujours porter une blouse, des gants et des lunettes de protection dans le cadre d'un travail avec des échantillons humains. La version actuelle de la Fiche de données de sécurité de ce produit peut être téléchargée depuis le site Web de Greiner Bio-One : www.gbo.com/bioscience/biochips_download... -
Page 15: Préparation En Colonne Unitaire (Réf. 515 040)
Tous les composants du kit doivent être conservés à température ambiante (de 18 à 25 °C). Ils restent stables pendant deux ans à compter de la date de fabrication. Avant d’initier à suivre le protocole du kit d'extraction d'ADN oCheck , préparer les solutions ®... -
Page 16: Préparation Des Échantillons
Préparation des échantillons pour PelvoCheck CT/NG ® Les échantillons d'urine humaine qui sont recueillis avec : • le kit de prélèvement PelvoCheck SAFE (Greiner Bio-One ; réf. 453 100) ® • le kit de prélèvement PelvoCheck STRAW (Greiner Bio-One ; réf. 453 101) ®... -
Page 17: Protocole Standard
Protocole standard 8.3.1 Préparation Vérifier que la centrifugeuse est réglée sur la température ambiante (de 18 à 25 °C). ➠ Préparer les échantillons conformément au chapitre 8.2. ➠ Régler les blocs chauffants ou les bains-marie respectivement sur 56 °C et 70 °C. ➠... -
Page 18: Fixation De L'adn
8.3.5 Fixation de l'ADN Afin d'éviter toute contamination : mettre de nouveaux gants avant cette étape ! Pour chaque échantillon, mettre une colonne dans un tube collecteur. ➠ Pipeter soigneusement 450 μl des lysats dans la colonne et centrifuger à 11 000 g pendant ➠... -
Page 19: Élution De L'adn
8.3.8 Élution de l'ADN Utiliser le tampon E préchauffé (70 °C) ! Pour éviter une baisse de la température pendant les étapes de pipetage, nous recommandons de remplir les microtubes de 1,5 ou 2,0 ml avec un maximum de 1 300 μl de tampon E (cela suffit pour n = 12 échantillons). Afin d'éviter toute contamination : mettre de nouveaux gants avant cette étape ! Placer la colonne dans un microtube de 1,5 ml propre. -
Page 20: Guide D'installation Et De Travail Pour Ocheck Vac Set Et Ocheck Vac Pump
® système permet une purification rapide simultanée d'acides nucléiques de haute qualité. Les étapes de centrifugation sont éliminées grâce à l'utilisation du vide. Les kits d'extraction d'ADN oCheck ® reposent sure le principe d’une technologie d'ultra-filtration et offrent une méthode rapide et pratique pour la purification des acides nucléiques. -
Page 21: Ocheck ® Vacpump
9.1.2 oCheck VacPump ® oCheck VacPump ® Tuyau de raccordement Silencieux Figure 3 : Composants de oCheck VacPump ® Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ® Révision 00 / Février 2011... -
Page 22: Montage Du Ocheck ® Vacset
S'assurer que les barrettes de colonnes et barrettes étanches s'adaptent correctement dans le support de colonne avant d'appliquer le vide. * Ne pas mettre le récipient à déchets au lave-vaisselle pour le laver ! Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ®... -
Page 23: Installation Pour L'élution De L'adn
élué (figure 4c). Revérifier que toutes les barrettes de colonnes et barrettes étanches sont toujours correctement ajustées dans le support de colonne. Figure 4c : Chaque colonne de barrettes de colonnes doit être située directement au-dessus d'un tube PCR de la barrette PCR. Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ®... -
Page 24: Montage Du Ocheck ® Vacpump
Lorsque les échantillons ont traversé le filtre des barrettes de colonnes, fermer le robinet de vide et arrêter la pompe à vide. Attendre environ 30 secondes jusqu'à ce que le support de colonne avec les barrettes de colonnes puisse être facilement retiré. Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ®... -
Page 25: Préparation En Barrettes De 8 Colonnes (Réf. 515 050)
Tous les composants du kit doivent être conservés à température ambiante (de 18 à 25 °C). Ils restent stables pendant deux ans à compter de la date de fabrication. Avant de commencer à suivre le protocole du kit d'extraction d'ADN oCheck , préparer les solutions ®... -
Page 26: Préparation Des Échantillons
PapilloCheck high-risk ® Les frottis du col de l'utérus qui sont recueillis avec • le kit de prélèvement PapilloCheck (Greiner Bio-One ; réf. 465 070) ® • et le milieu de prélèvement PreservCyt (Hologic, Bedford, MA, États-Unis) ® peuvent être traités directement. -
Page 27: Protocole Standard
10.3 Protocole standard Lors de l'utilisation du kit d'extraction d'ADN oCheck - Préparation en barrette de 8 colonnes - sous ® vide, un système de vide approprié est nécessaire. L'équipement nécessaire, ainsi que l'installation et les instructions de travail, sont décrits dans le chapitre 9. -
Page 28: Fixation De L'adn
S'assurer que les barrettes de colonnes et barrettes étanches s'adaptent correctement dans le support de colonne avant d'appliquer le vide. * Ne pas mettre le récipient à déchets au lave-vaisselle pour le laver ! Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ®... - Page 29 Pipeter soigneusement 900 μl des lysats dans les puits des barrettes de colonnes et veiller à ➠ ne pas toucher les bords des puits (figure 7). Figure 7 : Pipetage du lysat dans les puits des barrettes de colonnes Régler le vide sur -200 mbar à l'aide du manomètre (figure 8a). ➠...
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Page 30: Lavage Des Barrettes De Colonnes
10.3.6 Lavage des barrettes de colonnes Pour les étapes suivantes, l'utilisation de la micropipette à 8 canaux et des réservoirs pour réactifs est recommandée (pour les volumes de tampon requis en cas d'utilisation des réservoirs pour réactifs, voir le tableau 1). En cas d'utilisation des réservoirs pour tampons, préparer la quantité... -
Page 31: Séchage Des Barrettes De Colonnes
10.3.7 Séchage des barrettes de colonnes Après l'étape finale de lavage, arrêter le vide (section 9.6). Retirer le support de colonne avec ➠ les barrettes de colonnes. Pendant ce temps, retirer le couvercle de la chambre à vide et retirer le récipient à déchets usagé et le remplacer par le récipient à déchets inutilisé (propre). Insérer le couvercle de la chambre à... - Page 32 Figure 11 : Chaque colonne de barrettes de colonnes doit être située directement au-dessus d'un tube PCR de la barrette PCR. Pipeter 100 μl de tampon E préchauffé (70 ºC) directement sur la membrane de chaque barrette de ➠ colonne à l'aide d'une pipette mono-canal. Utiliser de nouvelles pointes pour chaque échantillon. Incuber pendant 5 minutes à...
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Page 33: Dépannage
: ajouter 1 volume de tampon L4 plus 1 volume d'éthanol (de 96 à 100 %) à l'éluat. Charger le mélange sur une colonne et procéder à l'étape de fixation de l'ADN (section 8.3.5 ou 10.3.5) du protocole standard. Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ®... -
Page 34: Assistance Technique
12. ASSISTANCE TECHNIQUE Greiner Bio-One possède un département de service technique dont le personnel est constitué de scientifiques expérimentés disposant d'un savoir-faire pratique et théorique approprié dans le domaine de la biologie moléculaire et des produits oCheck ® En cas de questions ou de difficultés concernant les produits oCheck , n'hésitez surtout pas à... -
Page 35: Protocoles Résumés
14. PROTOCOLES RÉSUMÉS Salle 1 14.1 Protocole résumé pour la préparation en colonne unitaire (réf. 515 040) Extraction d'ADN à l'aide du kit d'extraction d'ADN oCheck - Préparation avec ® une colonne unitaire (Greiner Bio-One ; réf. 515 040) 1. PRÉPARATION ➠... -
Page 36: Lavage Des Colonnes
100 μl de tampon E (préchauffé à 70 °C) É ➠ 1 minute à température ambiante (de 18 à 25 °C) ➠ 1 minute à 11 000 g É Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ® Révision 00 / Février 2011... - Page 37 8 colonnes (réf. 515 050) Extraction d'ADN à l'aide du kit d'extraction d'ADN oCheck ® Préparation en barrettes de 8 colonnes (Greiner Bio-One ; réf. 515 050) 1. PRÉPARATION Vérifier que la centrifugeuse est réglée sur la température ambiante (18 à 25 °C) ➠...
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Page 38: Lavage Des Barrettes De Colonnes
* Réduction de la pression atmosphérique : selon la viscosité de l'échantillon, il peut être nécessaire de prolonger le temps de filtration ou d'augmenter le vide (par exemple, de -200 à – 400 mbar). Kit d'extraction d'ADN oCheck - Instructions d'utilisation ®...