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Apprentissage de l'Encapsulator, emploi du réacteur complet
Après s'être familiarisé avec la formation de billes de Ca-alginate, effectuer une série d'essais avec le
réacteur complet pour simuler des conditions de travail stériles mais en utilisant une solution d'alginate
non stérile.
Les conditions de travail stériles présentent la difficulté supplémentaire de modifier quelque chose
dans le réacteur autoclavé sans perdre la stérilité, dans le cas par exemple où un composant aurait
été oublié ou mal monté. Il est donc important de bien préparer le réacteur avant la stérilisation. Suivre
les instructions d'assemblage et de stérilisation du réacteur consignées dans la section 5. En cas de
changement apporté, le noter dans une procédure séparée.
1. Préparer tous les réactifs nécessaires à l'encapsulation (par exemple pour l'encapsulation de
cellules animales, voir la section 6.14).
Pour cette
séquence :
Assembler un flacon à pression.
2. Prendre le réacteur autoclavé et le fixer à l'unité de commande.
Vérifier que le tube en silicone connecté à l'orifice de drainage du liquide de la plaque de base
du réacteur est fermé par un collier. S'assurer que le régulateur de collecte de billes du réacteur
est fermé, que l'agitateur magnétique se trouve sous le réacteur et que la pale de l'agitateur est
au-dessus de l'agitateur magnétique.
3. Introduire 500 mL de solution de polymérisation dans le flacon à pression. Fixer le tube en silicone
à la membrane filtrante à liquide.
Raccorder le flacon à pression à la sortie d'air de l'unité de commande. Allumer l'unité de
commande. Régler la pression d'air de 0,3 à 0,7 bar (4 à 10 psi). Lorsque le volume de liquide
pompé est suffisant, relâcher la pression d'air.
NOTE
Le volume de solution durcissante doit être 8 à 10 fois plus élevé que le volume de la matrice poly-
mérique. La solution de polymérisation doit remplir au moins 2 cm (environ ¾") du réacteur (200 mL
minimum).
4. Régler la fréquence de vibration, la tension électrostatique et, en cas d'utilisation de la pompe-
seringue, le débit de pompage aux valeurs appropriées déterminées précédemment. Régler la
vitesse de l'agitateur magnétique de façon à ce qu'un vortex soit à peine visible.
5. Remplir une seringue de 60 mL avec la solution d'alginate/d'échantillon et la fixer à l'Encapsulator.
Activer le système de commande des vibrations et régler la fréquence de vibration aux valeurs
prédéterminées à la section 6-9. Activer la pompe-seringue et régler la vitesse de pompage aux
valeurs déterminées précédemment. Enfoncer le bouton « turbo » jusqu'à formation d'un jet de
liquide continu. Activer le système de dispersion électrostatique. Au besoin, régler la vitesse de
pompage et/ou la fréquence pour obtenir une chaîne distincte jusque sous la coupelle de collecte.
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60 mL Solution d'alginate à 1,5 %
500 mL 100 mM de solution de polymérisation CaCl
600 mL 0,9 % NaCl + 10 mM de solution de lavage CaCl
Brancher l'unité de dispersion électrostatique (EDU) au fil rouge du réacteur.
–
Déplacer la coupelle de collecte de dérivation des billes sous la buse.
–
6 Fonctionnement
2
2
B-395 Pro Manuel d'utilisation, Version E
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