Vue D'ensemble De La Détection De La Fluorescence - Waters ACQUITY Premier Manuel D'utilisation Et De Maintenance

• Filtrage de la lumière source
• Excitation de l'échantillon par la lumière filtrée
• Réception et filtrage de la fluorescence émise
• Mesure de la fluorescence émise
• Amplification du signal émis
2.1.1 Vue d'ensemble de la détection de la fluorescence
Le détecteur de fluorescence à balayage irradie un échantillon avec une bande étroite de lumière
de forte intensité avant de mesurer les faibles niveaux de fluorescence émis par l'échantillon. La
lumière émise est filtrée, amplifiée, puis convertie en signaux électriques qui peuvent être
enregistrés et analysés.
2.1.1.1 Sources d'excitation
La source typique utilisée pour une détection de fluorescence est une lampe générant un spectre
stable et intense de lumière sur les plages UV-visible. L'intensité de la fluorescence qui en résulte
est directement liée à l'intensité du spectre d'excitation. Les détecteurs de sensibilité élevée
utilisent par conséquent les sources excitatrices les plus intenses possibles.
2.1.1.2 Types de sources lumineuses
Les lampes à arc au xénon et au mercure-xénon (Hg/Xe) sont couramment utilisées comme
sources lumineuses d'excitation. Les lampes au xénon sont les sources privilégiées pour les
détecteurs de fluorescence polyvalents. La lampe à arc Hg/Xe du détecteur FLR ACQUITY
Premier offre en outre une intensité plus élevée sur certaines bandes d'émission.
2.1.1.3 Sélection de la longueur d'onde d'excitation
Il est nécessaire de filtrer la lumière source pour obtenir la longueur d'onde d'excitation désirée.
Un monochromateur remplit généralement cette fonction dans les détecteurs modernes.
Un monochromateur est un dispositif réglable permettant de choisir certaines longueurs d'onde
sur un spectre étendu. Un monochromateur à réseau utilise un réseau de diffraction qui ne laisse
passer qu'une faible plage, appelée bande passante, de longueurs d'onde. En déplaçant le
réseau, des longueurs d'onde peuvent être sélectionnées sur une plage donnée de longueurs
d'onde. Un monochromateur à réseau permet également de laisser passer des fractions,
appelées ordres, d'une longueur d'onde choisie. Par exemple, un monochromateur réglé pour
laisser passer l'énergie lumineuse à 600 nm laisse également passer l'énergie à la longueur
d'onde de second ordre de 300 nm. Un filtre passe-haut permet d'absorber l'énergie d'ordre
supérieur produite par un monochromateur. De même que l'excitation est sélectionnée à l'aide
d'un monochromateur, l'émission (énergie rayonnée) peut également être sélectionnée. Les
détecteurs équipés de monochromateurs pour l'excitation et l'émission peuvent effectuer des
balayages en maintenant l'un des monochromateurs à une position donnée et en faisant varier la
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