Dispersion; Contamination Inter-Échantillons - Waters ACQUITY Premier Manuel

2.2 Dispersion

Les systèmes et passeurs d'échantillons UPLC présentent une faible dispersion, laquelle est une
caractéristique fixe des instruments, mesurée par l'étalement des pics en raison de la conception
du système.
La chromatographie à faible granulométrie utilise des colonnes courtes d'efficacité élevée. Une
colonne UPLC typique de 2,1 × 50 mm présente un volume d'environ 174 µL, contre 2,5 mL pour
une colonne HPLC classique de 4,6 × 150 mm. La taille inférieure des colonnes et des particules
nécessite un système faiblement dispersif réduisant la dilution et l'étalement des pics, ce qui
permet de conserver la finesse et la taille des pics et de bénéficier de toute la sensibilité des
colonnes d'efficacité élevée.
Le système ACQUITY Premier présente habituellement un étalement des pics (5σ) inférieur ou
égal à 12 µL, cette valeur dépendant de la configuration particulière de chaque système.
Il en résulte que les concentrations des pics UPLC sont supérieures à celles des pics HPLC. Les
effets de solubilité étant plus manifestes dans les systèmes à faible dispersion et à haute
pression, il est primordial de régler correctement la charge de la colonne.
2.3 Contamination inter-échantillons
Une contamination inter-échantillons se produit dans un système chromatographique lorsque le
pic d'un analyte précédemment injecté apparaît sur le chromatogramme des échantillons
suivants. La contamination inter-échantillons se produit généralement lorsqu'une faible quantité
d'analyte reste dans le système après injection. Elle se mesure en observant les pics d'analyte
qui apparaissent lorsque vous lancez une analyse de blanc immédiatement après un échantillon
analytique.
L'une des causes fréquentes de contamination inter-échantillons est un lavage incomplet du
système. Le choix du bon solvant de lavage pour une analyse spécifique permet de minimiser la
contamination inter-échantillons. Le solvant de lavage doit être suffisamment fort pour dissoudre
les éventuelles traces d'échantillon restantes. La durée de lavage doit être suffisante pour
éliminer le résidu du système.
Les conditions des méthodes affectent également la contamination inter-échantillons. Tous les
analytes ne seront pas éliminés du système si la durée de maintien des conditions finales du
gradient est trop courte, en particulier si la pente du gradient est forte. Purgez entièrement le
système et rééquilibrez la colonne avant de passer à l'analyse suivante. Sélectionnez avec
discernement les options Load-Ahead (Pré-charge) et Loop-Offline (Mise hors ligne de la
boucle). Si vous activez ces options avant que la partie majoritairement organique du gradient
n'atteigne l'aiguille, des résidus d'échantillon resteront dans le système et le temps
éventuellement gagné sera peut-être perdu à cause d'un nettoyage insuffisant du système.
L'hydrophobicité et la solubilité de vos échantillons, ainsi que le soin apporté à la préparation des
échantillons, sont autant de facteurs supplémentaires de minimisation de la contamination inter-
échantillons, tout comme la contamination issue des outils de préparation des échantillons.
2 février 2022, 715006884FR Version 01
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