Table des Matières
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Une cellule et un contrôleur de conductivité sont nécessaires pour mesurer l'efficacité
Etalonnage du
du processus de désionisation. Plus le formamide est désionisé, plus sa conductivité
contrôleur de
est faible.
conductivité
Dans la gamme de mesure, le contrôleur de conductivité doit être étalonné
régulièrement (jusqu'à 10 µSiemens/cm ou moins). Etalonner le contrôleur en utilisant
des solutions étalons de chlorure de potassium traçables auprès du NIST. Comme la
température affecte la conductivité, les échantillons doivent être amenés à
température ambiante avant de mesurer la conductivité.
L'EDTA alcalin (acide éthylènedinitrilotétracétique) est ajouté au formamide désionisé
Préparation
pour le stabiliser et faciliter l'injection électrocinétique de l'ADN. Pour minimiser la
de l'EDTA
quantité d'eau à ajouter au formamide, une solution mère concentrée (200-mM)
d'EDTA est ajoutée.
Pour préparer la solution mère de 200-mM d'EDTA :
Etape
1
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3
4
Préparation du
AVERTISSEMENT
!
par la peau ; il peut également provoquer une irritation des yeux, de la peau et de l'appareil
formamide
respiratoire. Il risque d'endommager le système nerveux central et les systèmes de
reproduction féminin et masculin, et pose un risque possible de malformation congénitale.
Prière de lire la fiche signalétique applicable et de suivre les consignes de manipulation. Porter
des protections oculaires, des gants et des vêtements appropriés.
Pour commencer la purification et mesurer la conductivité :
Etape
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Action
Ajouter 7,44 g de Na
EDTA à 70 ml d'eau désionisée et remuer.
2
Tout en remuant, ajuster lentement au pH 8,0–8,8 en ajoutant au goutte à goutte
une solution concentrée d'hydroxyde de sodium.
Remarque Cela aide l'EDTA à se dissoudre au fil du temps, car l'EDTA a une
solubilité limitée, jusqu'à ce que le pH soit augmenté.
Diluer jusqu'à 100 ml avec de l'eau désionisée.
Entreposer à 4 °C.
DANGER CHIMIQUE. Le formamide est dangereux s'il est absorbé
Action
Etalonner la cellule du contrôleur de conductivité, et la rincer avec de l'eau distillée.
Dans un récipient vissable en polypropylène, laver 10 g de résine échangeuse
d'ions Bio-Rad AG501 X8 en la mélangeant avec 10 à 20 ml de formamide pendant
1 mn.
Décanter ou filtrer avec un filtre de téflon ou de nylon grossier, et jeter le formamide.
Répéter deux fois les étapes 2 et 3.
Ajouter 100 ml de formamide à la résine lavée.
Enfermer le mélange en veillant à ce que le récipient soit hermétiquement fermé.
Remuer rapidement le mélange avec un agitateur magnétique, ou mélanger avec
un mixeur électrique, en veillant à ce que la résine soit suspendue pour que le
mélange et l'échange ionique soient adéquats. Remuer à température ambiante
pendant environ 2 heures.
Enlever un aliquot du mélange, et mesurer la conductivité à température ambiante.
Rincer la cellule de conductivité à l'eau distillée.
Préparation du formamide A-3
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