Table des Matières
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Exécution d'une calibration spectrale
Introduction
Quand faut-il
exécuter une
calibration spectrale
Préparation des
standards de matrice
pour les matrices
du jeu de
fluorophores D
4-6 Calibrations spatiale et spectrale
L'exécution d'une calibration spectrale comprend trois grands volets :
Définition des normes
Lancement de la calibration spectrale
Vérification de la calibration spectrale
Remarque Cette section explique la calibration spectrale en utilisant le jeu de standards de
matrice DS-30. Pour des détails sur la calibration spectrale pour un autre jeu de fluorophores,
se reporter au Manuel d'utilisation de l'analyseur génétique 3100 ABI P
La calibration spectrale permet de créer une matrice afin de corriger le
chevauchement spectral des émissions de fluorescence des fluorophores.
L'application de cette matrice aux données brutes est le processus multicomposant.
Pour une explication plus détaillée de la calibration spectrale, se reporter au Manuel
d'utilisation de l'analyseur génétique 3100 ABI P
Une calibration spectrale doit être effectué :
chaque fois qu'un nouveau jeu de fluorophores est utilisé sur l'instrument
après le réalignement du laser ou de la caméra CCD par l'ingénieur de service
quand on constate une diminution de la calibration spectrale (pics vers le haut
et/ou vers le bas apparaissant dans les autres couleurs sous un pic donné : par
exemple, un pic de vert apparaissant systématiquement sous un pic bleu avec le
même ratio entre eux).
Pour préparer les standards de matrice pour les matrices du jeu de fluorophores D :
Etape
Action
1
Décongeler et homogénéiser les quatre tubes de standards de matrice DS-30
(Réf. nº 4316100).
2
Centrifuger brièvement les tubes.
3
Préparer le jeu de standards de matrice DS-30 pour le jeu de fluorophores D en
combinant dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5-ml les éléments suivants :
Réactif
6FAM
HEX
NED
ROX
Formamide Hi-Di
Volume final
AVERTISSEMENT
!
est absorbé par la peau ; il peut également provoquer une irritation des yeux, de la
peau et de l'appareil respiratoire. Il risque d'endommager le système nerveux
central et les systèmes de reproduction féminin et masculin, et pose un risque
possible de malformation congénitale. Prière de lire la fiche signalétique applicable
et de suivre les consignes de manipulation. Porter des protections oculaires, des
gants et des vêtements appropriés.
RISM
(Réf. nº 4311320)
TM
DANGER CHIMIQUE. Le formamide est dangereux s'il
.
RISM
.
Volume (µl)
1,25
1,25
1,25
1,25
195
200
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