Table des Matières
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Préparation de l'échantillon
Jeu de fluorophores
Indices de
regroupement
Volumes de
chargement suggérés
Le logiciel de collecte des données ABI P
prend en charge le jeu de fluorophores DS-30 et les kits "linkage mapping set"
®
ABI P
LD20, MD10 et HD5.
RISM
Les fluorophores du jeu DS-30 sont 6-FAM (bleu), HEX (vert), NED (jaune) et ROX
(rouge).
Les différents fluorophores sont détectés avec des efficacités différentes. L'indice de
regroupement, soit la quantité ajoutée de produit marqué par un fluorophore par
rapport aux autres produits du groupe, doit être ajusté pour assurer une détection
appropriée de tous les loci.
Indices de regroupement pour les kits d'amplification microsatellites « linkage mapping
set » ABI P
RISM
Pour les kits LD20, MD10 et HD5, un indice de 1:1:1 (produits marqués au
6-FAM:HEX:NED) donne un équilibre acceptable sur la plupart des loci. Pour chaque
panel des kits, grouper 1 µl de chaque produit ACP (PCR) dans un tube pour
microcentrifugeuse. Si nécessaire, amener le volume total à 10–20 µl avec de l'eau
désionisée.
Placer un aliquot de 10 µl de produit ACP (PCR) dilué dans des plaques optiques
MicroAmp à 96 ou 384 puits.
!
AVERTISSEMENT
absorbé par la peau ; il peut également provoquer une irritation des yeux, de la peau et de
l'appareil respiratoire. Il risque d'endommager le système nerveux central et les systèmes de
reproduction féminin et masculin, et pose un risque possible de malformation congénitale.
Prière de lire la fiche signalétique applicable et de suivre les consignes de manipulation. Porter
des protections oculaires, des gants et des vêtements appropriés.
Préparer le mélange étalon de masse moléculaire:formamide en utilisant :
1000 µl de formamide Hi-Di™ (Réf. n° 4311320) ou une qualité similaire de
formamide
50 µl de GeneScan™-400HD ROX ou 50 µl de GeneScan™-500 ROX
Remarque Nous recommandons d'utiliser du formamide Hi-Di, mais si l'opérateur préfère
préparer son propre formamide, la section Appendix A, « Préparation du formamide », contient
des informations importantes à ce sujet.
Remarque Ces indices de produits ACP (PCR) groupés et ces étalons de masse moléculaire ne
doivent être utilisés que comme point de départ. Optimiser ces indices, s'il y a lieu, en tenant
compte des résultats obtenus en laboratoire.
Pour le chargement, mélanger 1 µl de produits ACP (PCR) groupé avec 10 µl du
mélange étalon de masse moléculaire:formamide.
®
RISM
DANGER CHIMIQUE. Le formamide est dangereux s'il est
3100 Data Collection version 1.0.1
Exécution d'une analyse de fragment 2-3
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