Limites De La Détection Els - Waters Acquity Uplc Guide D'initiation

• La diffusion par réfraction-réflexion concerne les particules pour
lesquelles
signal diffusé est proportionnel à c
• Au cours de l'élution dans la colonne d'un pic chromatographique, la
concentration de l'analyte correspondant varie : de presque nulle à la ligne
de base jusqu'à un maximum qui dépend de l'efficacité de la colonne, du
volume d'injection, du temps de rétention et de la concentration de l'échan-
tillon à l'injection. De son niveau maximal, la concentration revient ensuite
à une valeur proche de zéro. Si la concentration est suffisamment élevée, le
diamètre d'une particule d'analyte sèche peut passer par les trois régimes
de diffusion :diffusion de Rayleigh, de Mie et par réfraction-réflexion.
Ce phénomène explique que les courbes d'étalonnage en détection ELS
ne puissent être linéaires sur plus d'un ordre de grandeur.
Limites de la détection ELS
Les limites suivantes doivent être prises en compte lors de la mise en œuvre
de méthodes de séparation globales par détection ELS :
• La détection ELS est non linéaire pour de larges plages de concentra-
tions. Pour effectuer des dosages sur le détecteur, il peut être nécessaire
de tester plusieurs « ajustements optimaux » en utilisant des réponses
linéaires, quadratiques et log-log pour les composés d'intérêt. Il peut
également être nécessaire d'établir des regroupements sur les plages
de concentration prévues.
• La détection ELS est une technique destructive. L'analyte est sacrifié
pour générer les particules diffusantes. Le détecteur ELS doit donc
idéalement être le dernier détecteur d'une série. Vous pouvez également
placer le détecteur ELS en amont des autres, à condition de diviser
l'effluent de la colonne pour le distribuer au détecteur ELS.
• Toute particule peut interférer avec le signal de l'échantillon, y compris
les particules de solvants chromatographiques de qualité médiocre, car
le détecteur répond de manière identique à toutes les particules. Ce
manque de sélectivité peut causer un bruit de fond problématique.
• La sensibilité du détecteur aux particules augmente le bruit. Elle crée
par conséquent une variation du rapport signal sur bruit pour une
méthode donnée, en raison des différences de qualité des phases
mobiles. Par ailleurs, des composants de la phase stationnaire peuvent
être extraits de la colonne et s'ajouter aux particules du courant de
l'échantillon.
1-6 Principes optiques du détecteur ELS ACQUITY UPLC
D
>1,0. La lumière diffusée est proportionnelle à D
--- -

2/3
.
2
, et le