cytiva miniVE Mode D'emploi page 40

5 Fonctionnement
5.2 Module d'électrotransfert
5.2.1 Préparation du module d'électrotransfert
Préparation des composants de la
pile de transfert
Suivre les instructions ci-dessous pour préparer les composants de la pile de transfert.
Remarque :
Étape
1
2
3
4
5
Préparation de la pile de transfert
Suivre les instructions ci-dessous pour préparer la pile de transfert.
Effectuer le transfert dès que possible après l'électrophorèse pour minimiser la diffu-
sion de l'échantillon dans le gel. Il est possible d'effectuer un transfert électrophoré-
tique sur quatre mini-gels maximum en même temps, à condition de placer deux gels
dans chacun des deux modules.
Remarque :
40
Toujours porter des gants lors de la manipulation des
membranes afin de ne pas y laisser d'empreintes digitales.
Action
Pour chaque gel, couper la membrane et deux morceaux de papier filtre de la
même taille que le gel, sans dépasser 8,5 × 10,5 cm.
Remarque :
La taille du gel détermine celle de la membrane et du papier filtre.
Équilibrer le gel dans un tampon de transfert pendant 10 min.
Astuce :
L'équilibrage permet au gel de gonfler ou de rétrécir avant d'entrer en
contact avec la membrane de transfert, et d'éliminer l'excès de détergents et
de sels de tampon du gel. Un équilibrage trop long risque de créer des
bandes diffuses.
Préhumidifier des membranes en nitrocellulose ou en nylon dans de l'eau
distillée, en veillant à ne pas piéger de bulles d'air. Tremper une extrémité de
la membrane dans le tampon et l'immerger lentement en la laissant s'humi-
difier par capillarité.
Préhumidifier les membranes en PVDF ou hydrophobes avec du méthanol.
Après la préhumidification de la membrane, tremper cette dernière dans le
tampon de transfert pendant 2 à 5 min.
Humidifier le papier filtre dans le tampon de transfert.
Toujours porter des gants lors de la manipulation des
membranes afin de ne pas y laisser d'empreintes digitales.
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