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Procédure II - Deux analyses par CPL avec le FLD
Les conditions de séparation de composés organiques tels que les hydrocarbu-
res aromatiques polynucléaires (HAP) sont bien décrites dans diverses métho-
des standard, notamment dans les méthodes EPA et DIN couramment
utilisées. Pour obtenir les meilleures limites de détection, vous devez détermi-
ner les longueurs d'onde d'excitation et d'émission optimales pour tous les
composés. Cependant, il est fastidieux d'effectuer des balayages fluorimétri-
ques individuels. Il est préférable d'acquérir les spectres en ligne pour tous les
composés au cours d'une analyse. Cette approche accélère considérablement
le développement de méthodes. Deux analyses suffisent pour l'optimisation.
Au cours de la première analyse, on sélectionne une longueur d'onde d'excita-
tion dans la région basse de l'UV et une longueur d'onde d'émission dans le
domaine spectral des longueurs d'onde d'émission. La plupart des fluoropho-
res absorbent fortement à ces longueurs d'onde et le rendement quantique est
élevé. L'excitation est suffisante pour acquérir des spectres d'émission.
Tableau
unique d'un mélange de 15 aromatiques polynucléaires. Cet ensemble de
spectres sert à établir un tableau de chronoprogrammation des longueurs
d'onde d'émission optimales pour tous les composés.
Le tracé d'isoabsorbance des spectres des composés individuels montre que
trois longueurs d'onde d'émission au moins sont nécessaires pour détecter
correctement les 15 aromatiques polynucléaires :
Tableau 10 Tableau de chronoprogrammation pour l'analyse des aromatiques polynucléa-
0 min :
8,2 min :
19,0 min :
Lors de la deuxième analyse, trois points de consigne pour les longueurs
d'onde d'émission sont entrés dans le tableau de chronoprogrammation et les
spectres d'excitation sont enregistrés, comme illustré dans la
page 88. La zone d'intensité élevée (rouge) est due à de la lumière parasite lors
du chevauchement des spectres d'émission et de la longueur d'onde d'excita-
tion. Ce problème peut être évité en ajustant automatiquement le domaine
spectral. Une longueur d'onde d'excitation de 260 nm convient particulière-
ment bien à tous les aromatiques polynucléaires.
Manuel d'utilisation du FLD Agilent 1260
, page 87 montre tous les spectres d'émission obtenus en une analyse
ires
350 nm
420 nm
500 nm
Utilisation du détecteur à fluorescence
Développement de méthodes
du naphtalène au phénanthrène
de l'anthracène au benzo(g,h,I)pérylène
pour l'indéno(1,2,3-cd)pyrène
4
Figure
33,
85
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