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NB : Si la chiffonnette a absorbé la totalité du liquide, ajouter 10 ml d'eau peptonée et malaxer à nouveau le
sachet
.
Transférer 200 µl de suspension dans un microtube dans un microtube contenant180 µl de tampon ATL et
20 µl de protéinase K. Vortexer.
Cf. § IV 3b pour l'extraction et la purification des ADN.
Couper 1 cm² de la carte FTA et introduire les morceaux dans un tube adapté.
Ajouter 1 ml d'eau physiologique
Incuber 1 nuit à température ambiante.
Transférer 200 µl de surnageant dans un microtube contenant180 µl de tampon ATL et 20 µl de protéinase
K. Vortexer.
Cf. § IV 3b pour l'extraction et la purification des ADN.
b) Protocole
Toutes les centrifugations sont réalisées à température ambiante.
Préparation des
échantillons
Lyse
Préparation de
la fixation
Transfert sur
colonnes et
fixation à la
Si la totalité du mélange n'a pas pu être déposé en une seule fois sur la colonne, déposer le
membrane
er
1
lavage
ème
2
lavage
Séchage de la
colonne
Elution
Conservation
5) À partir de carte FTA
Ecouvillon / Cuture / chiffonnette / Carte FTA
Homogénéiser par flux et reflux à la pipette (~10 fois) ou au vortex (~15 secondes).
Identifier les colonnes, déposer la totalité de chaque échantillon sur une colonne.
volume restant sur la colonne et centrifuger 1 minute à 10 000 g.
Changer le tube collecteur et ajouter 500 µl de tampon AW1.
Changer le tube collecteur et ajouter 500 µl de tampon AW2.
Transférer la colonne sur un microtube. Déposer 200 µl de tampon AE.
Incuber ~1 minute à température ambiante et centrifuger 1 minute à 10 000 g.
Fermer les tubes, identifier et conserver à +2/8°C pendant 24 heures, puis à <-15°C.
Cf IV 3.a
Incuber 15 minutes à +56°C.
Ajouter 200 µl de tampon AL. Vortexer.
Incuber 10 minutes à +70°C.
Ajouter 200 µl d'éthanol 100%.
Centrifuger 1 minute à 10 000 g.
Centrifuger 1 minute à 10 000 g.
Centrifuger 1 minute à 10 000 g.
Changer le tube collecteur.
Centrifuger 3 minutes à 10 000 g.
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