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III. Préconisations avant l'analyse des échantillons
Avant de commencer l'essai, lire l'ensemble du protocole et le respecter scrupuleusement.
1. Précautions
Adiagène a validé ce test avec les kits d'extraction d'ADN des sociétés Bio-X Diagnostics,
Qiagen. D'autres kits d'extraction peuvent être utilisés avec une validation préalable.
Respecter les recommandations des fabricants pour la conservation, la préparation et
l'utilisation des réactifs contenus dans les kits d'extraction.
Certains kits contiennent et/ou nécessitent l'utilisation de composés toxiques. Ces produits
doivent être manipulés avec des gants et sous hotte chimique.
Nous conseillons vivement que cet essai soit réalisé par des personnes ayant reçu une
formation appropriée. Vérifier l'exactitude et la précision des micropipettes utilisées. La
qualité des résultats dépend du respect scrupuleux des bonnes pratiques de laboratoire.
La réaction PCR génère de grandes quantités d'ADN amplifié. Quelques molécules de
produits amplifiés peuvent générer des résultats positifs. Il est donc important de bien
séparer la zone d'analyse des produits amplifiés de la zone où sont manipulés les
échantillons à analyser et de ne pas ouvrir les tubes après amplification.
Les échantillons à analyser doivent être manipulés et éliminés comme des déchets
biologiques. Prendre toutes les dispositions de sécurité et de confinement requises pour la
manipulation des agents biologiques concernés.
Nous vous recommandons de faire des fractions aliquotées d'eau déminéralisée et d'eau
physiologique, de les autoclaver (25 minutes à +120°C) et de changer de tube d'eau lors de
chaque manipulation afin d'éviter toute contamination.
2. Conservation des échantillons et des extraits d'ADN
Les échantillons se conservent à +2/8°C pendant 48 heures. Au-delà, les conserver à <-15°C.
Les ADN extraits sont des molécules sensibles. Les extraits d'ADN peuvent être stockés dès la
fin de l'extraction à +2/8°C pendant 24 heures, puis doivent être conservés à <-15°C.
3. Préparation des témoins
L'emploi de témoins permet de contrôler la fiabilité des résultats.
Les témoins sont à inclure par série d'analyse. Une série est définie comme un ensemble
d'échantillons pour lesquels chaque étape a été réalisée dans les mêmes conditions.
L'étape d'amplification, quelles que soient les matrices, est validée grâce à la combinaison
des témoins inclus dans le kit Adiagène.
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Le contrôle exogène non cible d'amplification (EPC-Amp) ajouté dans le réactif
A5 vérifie l'amplification de chaque échantillon. (Si extraction ADN autre que le
kit ADIAPURE™ SLB)
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Le contrôle exogène non cible d'extraction (inclus dans le tampon L3 du kit
ADIAPURE™ SLB) ajouté dans le réactif A5 vérifie les étapes d'extraction et
l'amplification de chaque échantillon.
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Les témoins « CTL+ » valident l'amplification des 2 cibles.
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