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Nettoyer soigneusement les flacons de milieu de culture dans de l'eau chaude et propre avant utilisation. Si
nécessaire, utiliser un détergent léger puis bien rincer avec de l'eau propre jusqu'à ce qu'il n'y ait plus de
trace de détergent.
1. Si possible se procurer de l'eau distillée. Dans le cas contraire, utiliser l'eau la plus propre possible, par
exemple de l'eau de pluie, filtrée ou bouillie. Si nécessaire, laisser reposer l'eau "brute" une nuit dans un
récipient. Ne jamais utiliser de l'eau chlorée.
2. Utiliser le testeur de pH du kit pour vérifier que le pH de l'eau est compris entre 6,8 et 8,2. Dans le cas
contraire utiliser une autre source.
3. Verser 500ml d'eau propre dans un bécher.
4. Verser 500ml d'eau dans un bécher et ajouter 38,1g de milieu de Lauryl sulphate. Mélanger et chauffer à
feu doux pour dissoudre complètement les cristaux. Ne pas laisser bouillir. Le milieu de culture sera dissout
dès qu'une couleur rouge vif apparaîtra.
5. Verser des quantités adéquates du milieu dans des flacons de polypropylène. Vous aurez besoin d'environ
2,5ml de milieu par prélèvement. Chaque flacon devrait contenir assez de milieu pour une journée
d'utilisation. Le kit contient suffisamment de boîtes de Pétri pour traiter 16 prélèvements par jour.
6. Replacer les bouchons de polypropylène sur les flacons et les serrer délicatement de façon à ne pas causer
de fuite.
7. Si une cocotte-minute est disponible, stériliser le milieu de culture tel qu'il est indiqué au point 5 en haut
de la page 10.
8. Si une cocotte-minute ou un stérilisateur portatif ne sont pas disponibles, mettre les flacons de milieu de
culture dans un récipient de cuisson ou casserole rempli d'eau bouillante, ne pas mettre les flacons
directement en contact avec le fond de la casserole (utiliser un portoir ou une étale). Faire bouillir pendant 20
minutes. Stocker les flacons stérilisés dans un endroit sombre et frais. Utiliser tout milieu de culture préparé
de cette façon dans les 24 heures.
3.3
Stockage du milieu de culture
Le milieu de culture qui a été stérilisé dans un autoclave ou une cocotte-minute et stocké dans un endroit
sombre et frais devrait normalement se conserver pendant plusieurs mois. Si des signes d'altération
apparaissent, par exemple liquide trouble ou coloration jaune, le contenu du flacon doit être jeté. Dans le cas
où le milieu serait rangé dans un environnement froid, par exemple un réfrigérateur, un dépôt peut se former
mais il disparaîtra dès que le flacon sera réchauffé ou secoué. Ce dépôt ne signifie pas que le milieu est altéré,
c'est une propriété du lauryl sulphate.
3.4
Elimination de matières contaminées
Pour éviter tout risque d'infection à cause de matières contaminées, ne pas toucher directement toute
membrane contaminée. Ne pas manger, boire ou fumer lors de la manipulation de matériel contaminé. Se
laver les mains immédiatement. Tout matériel contaminé, tels que des membranes et buvards usagés, ne sont
plus contaminés s'ils sont autoclavés ou incinérés. Ne pas jeter des membranes ou buvards non-stérilisés. Les
boîtes de pétri doivent être soigneusement lavées avec un détergent après utilisation, puis rincées à l'eau
propre et séchées.
Différentes façons de procéder pour la stérilisation des boîtes:
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