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3.1
Préparation du milieu de culture dans un laboratoire central
Se munir des éléments suivants:
1.
Lauryl sulphate (milieu de culture)
2.
Eau distillée
3.
Flacons de polypropylène
4.
Verre a pied ou bécher
5.
Cocotte-minute, stérilisateur ou autoclave
Surface chauffante, étuve ou brûleur
6.
*Remarque: Un stérilisateur portatif est disponible au Centre Robens
Nettoyer soigneusement les flacons en plastique de milieu de culture, chauffer l'eau avant utilisation. Si
nécessaire, utiliser détergent léger et ensuite rincer soigneusement avec de l'eau propre pour enlever toute
trace de détergent.
1. Verser 38,1g de milieu de Lauryl sulphate dans le verre à pied ou bécher et ajouter 500ml d'eau distillée
ou de l'eau de pluie filtrée. La poudre de milieu est généralement fournie dans des tubes de 38,1g. Des
tubes de 500g sont disponibles pour ceux qui ont besoin de grandes quantités de milieu de culture. Etant
donné que la poudre de milieu de culture absorbe l'eau, veiller à la conserver dans son flacon, le bouchon
bien serré jusqu'à utilisation entière sinon il peut se détériorer avec le contact de l'air.
2. Chauffer à feu doux le mélange en remuant constamment jusqu'à la dissolution complète de la poudre. Ne
pas porter à ébullition. Le milieu de culture sera dissout lorsqu'on verra apparaître une couleur rouge vif.
3. Verser des quantités adéquates du milieu de culture dans les flacons de polypropylène. Environ 2,5ml de
milieu par prélèvement sont nécessaires. Chaque flacon devrait contenir assez de milieu pour une journée
d'utilisation. Le kit contient assez de boîtes de Pétri pour traiter 16 échantillons par jour.
4. Replacer les bouchons sur les flacons. Ne pas les serrer trop fort car ceci pourrait entraîner des fuites.
5. Si un autoclave conventionnel est disponible, autoclaver les flacons, les bouchons desserrés, à 121
pendant 10 minutes. Serrer délicatement les bouchons une fois refroidis.
Si un autoclave n'est pas disponible, utiliser une cocotte-minute classique ou un stérilisateur portatif. Placer
les flacons sur un portoir dans la cocotte-minute (ces derniers pourraient se mélanger si vous les déposer
directement dans le fond de la cocotte-minute), remettre le couvercle et chauffer à pression maximum
(environ 15psi). Une fois que la pression maximum est atteinte, la maintenir pendant 15 minutes. Eteindre la
surface chauffante et laisser la cocotte-minute refroidir. Sortir les flacons et les ranger dans un endroit
sombre et frais.
3.2
Préparation du milieu de culture sur le terrain
Se munir des éléments suivants:
1.
Lauryl sulphate
2.
Eau propre
3.
Flacons de polypropylène
4.
Stérilisateur portatif, cocotte-minute, récipient de cuisson, casserole (1 des 4)
8
o
C
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