Principes De Fonctionnement De La Cuve De Circulation À Lumière Dirigée - Waters Acquity Uplc Pda Elambda Manuel D'introduction

Absorbance en fonction de la concentration
Principes de fonctionnement de la cuve de circulation à
lumière dirigée
Les colonnes de petit calibre et de capacité élevée, comme celles utilisées en
UPLC, produisent des pics de volume faible. Pour éviter l'étalement des pics et
maintenir la concentration, le volume de la cuve de circulation du détecteur
doit être proportionnellement réduit. Une bonne méthode empirique consiste
à maintenir le volume de la cuve à un maximum de 1/10
Pour obtenir la réduction de volume requise au moyen des cuves de circulation
conventionnelles du détecteur d'absorbance, la longueur de la trajectoire doit
être réduite pour éviter une chute brutale du débit lumineux. La réduction de
la longueur de trajectoire diminue la sensibilité analytique, conformément à la
loi de Beer. Des intensités lumineuses importantes sont toutefois nécessaires
pour préserver un rapport signal/bruit élevé.
Heureusement, une cuve de circulation à lumière dirigée de petit volume peut
être conçue pour intégrer une longueur de trajectoire optimale et un débit
lumineux élevé. Une telle cuve de circulation est similaire à une fibre optique
dans laquelle le noyau est le fluide de l'échantillon et la gaine est en Teflon
AF, un fluoropolymère particulier, amorphe, inerte chimiquement, produit par
DuPont. L'indice de réfraction du Teflon AF est inférieur à celui de l'eau ou de
toute autre phase mobile de HPLC. Les rayons lumineux qui pénètrent le
noyau liquide selon le demi-angle de cône α sont totalement réfléchis à l'inté-
rieur par la frontière en Teflon AF. Ces rayons sont transmis via la cuve de
circulation, en théorie sans subir de perte, à l'exception de l'absorption par
l'échantillon.
Idéale
Plage de travail
Absorbance résiduelle
Concentration
Réelle
ème
du volume de pic.
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