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b. Réalisation du test
N°
Description des étapes
Compter le nombre de lames qu'il faudra pour réaliser le test. Retirer les lames
nécessaires de leur emballage de protection et les marquer à l'aide d'un crayon. Éviter
1.
de toucher les puits.
Veiller à ce que les lames ne sèchent pas tout au long du déroulement du test.
Préparation du Plateau d'incubation: Placez un petit volume d'eau déminéralisée
ou déionisée dans un plateau d'incubateur et placez la lame(s) sur les supports dans
le plateau d'incubateur.
Incuber les lames 30 ± 10 minutes à température ambiante dans le plateau
d'incubation humide. Utiliser des temps d'incubation du conjugué cohérents.
Première incubation: Pipeter une quantité suffisante de chaque sérum dilué et de
2.
contrôles (prêts à l'emploi) dans les puits appropriés ; éviter tout contact direct de la
pipette avec la surface de la lame.
Éviter un contact direct de l'embout de la pipette avec la surface de la lame. S'assurer
que chaque puits est complètement recouvert avec le sérum correspondant ou le
contrôle. Pour cela, il est important d'utiliser autant de matériel qu'il sera nécessaire.
Mais éviter le débordement des échantillons de sérum entre les puits, car cela peut
fausser les résultats.
Lavage : Après incubation, retirer les lames du plateau d'incubation et rincer
brièvement avec le tampon de lavage en utilisant une bouteille de lavage à pression.
Ne pas injecter de tampon directement sur les puits.
NOTEZ : Afin de prévenir les contaminations croisées incliner d'abord les lames sur un
côté, puis appliquer un courant de tampon de lavage délicatement le long du milieu de
la lame. Puis incliner la lame sur l'autre côté et répéter cette procédure de lavage.
Laver les lames 10 minutes avec les tampon de lavage dans un bac de marquage de
3.
lames. Eviter tout contact d'élements solides avec le substrat. Pour un résultat optimal
changer la solution de tampon après 5 minutes.
Retirer les lames du bac et retirer délicatement l'excès de tampon de lavage.
NOTEZ : Il est important que les puits des lames de s'assèchent pas durant la
procédure car cela peut endommager le substrat. Merci de ne pas sécher la lame ou la
laisser sans réactif fluorescent plus de quelques secondes.
Deuxième incubation: Après le lavage, remettre immédiatement la lame dans la
chambre humide et recouvrir chaque puits avec 30 µl de conjugué FITC prêt à
4.
l'emploi.
Incuber les lames 30 ± 10 minutes à température ambiante dans l'obscurité
Lavage: Après incubation, retirer les lames du plateau d'incubation et rincer
brièvement avec le tampon de lavage en utilisant une bouteille de lavage à pression.
Ne pas injecter de tampon directement sur les puits.Laver les lames 10 minutes avec
5.
les tampon de lavage dans un bac de marquage de lames. Pour un résultat optimal
changer la solution de tampon après 5 minutes.
*Contre-coloration facultative : Diluer le contre-colorant (Bleu d'Evans) dans une
proportion 1:3000 dans le tampon de lavage et bien mélanger. Incliner le contre-
colorant dans le bac de coloration et incuber les lames dedans. Se reporter à la
6.
section Procédure de test avec le kit ci-dessus en fonction de la référence produit
utilisée pour obtenir des détails sur la durée de l'incubation. Le Bleu d'Evans couvre
une fluorescence de fond non spécifique.
Doc. :
AESKUSLIDES – ANA-HEp-2 Bulk
Rév. :
Page :
005:2018-09-28
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