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3.7 Tyndallisation des DMM
Au cas où il serait impossible d'utiliser un
autoclave ou un autocuiseur, la stérilisation
des DMM contenant le milieu BSLM liquide
peut être effectuée à l'aide d'une casserole
d'eau bouillante. Il s'agit d'un procédé
nommé tyndallisation.
Lorsque des liquides sont chauffés jusqu'à
100°C, la chaleur tue les cellules bactériennes
mais les spores bactériennes peuvent survivre.
La tyndallisation consiste essentiellement à
faire bouillir la substance pendant 15 minutes
pendant trois jours consécutifs. Le deuxième
jour, la plupart des spores qui ont survécu au
premier auront germé en cellules bactériennes.
Ces cellules seront tuées par le deuxième
jour de chaleur. Le troisième jour, les cellules
bactériennes sont tuées par les spores ayant
germé tardivement. Pendant les périodes
d'attente, sur trois jours, la substance en
cours de stérilisation est conservée dans des
conditions chaudes et humides, propices à la
germination des spores. Si l'environnement
est propice à la formation de cellules à partir
de spores, la formation de spores à partir de
cellules n'a pas lieu.
La tyndallisation se résume comme suit:
• JOUR 1: Placez les DMM contenant
le BSLM dans une casserole ou un pot
d'eau bouillante, utilisez un casier ou un
support si possible et essayez d'empêcher
que les DMM entrent en contact avec le
fond de la casserole
• Faites bouillir pendant 15 minutes
• Laissez le BLSM refroidir et laissez ensuite
à température ambiante pendant 24 heures
• JOUR 2: Une nouvelle fois, faites chauffer
le BLSM dans une casserole d'eau bouillante
pendant encore 15 minutes
• Laissez le BLSM refroidir et laissez ensuite à
température ambiante pendant 24 heures
• JOUR 3: Répétez l'immersion dans de
l'eau bouillante pendant 15 minutes
pour la troisième et dernière fois
• Les milieux BLSM devraient maintenant
être stériles
3.8 Stockage de milieux liquides
Le BLSM stérile devrait rester stable jusqu'à
6 mois s'il est conservé au réfrigérateur. En
l'absence de réfrigérateur disponible, le milieu
peut être conservé jusqu'à 3 mois dans un
endroit sombre éloigné de la chaleur et
de l'humidité extrêmes. Toutefois, en cas
de signes de contamination comme le
jaunissement, la formation d'un précipité,
etc., il y a contamination. Il doit être mis
au rebut et en aucun cas utilisé dans une
analyse microbiologique.
3.9 Milieu préparés à l'avance
IIl est possible d'utiliser un milieu de culture
préparé à l'avance plutôt que de préparer
le vôtre comme décrit précédemment. Les
principaux avantages de ces options sont le
gain de temps et la réduction de la quantité
de matériel nécessaire. Toutefois, il convient
de noter qu'ils sont généralement plus onéreux
en termes de coûts par analyse, et leur durée
de vie est plus courte.
Ce qui rend le transport vers des sites
éloignés, et leur utilisation dans ces sites,
plus problématique. Certains des milieux
préparés à l'avance nécessitent également
des conditions de stockage spécifiques.
Les options de milieux préparés à l'avance
les plus couramment utilisées sont:
Ampoules
Ampoules stériles contenant 2 ml de milieux
dissous. Disponibles dans différentes variétés
pour l'analyse d'un éventail de micro-organismes.
Dévissez simplement le bouchon, versez le
milieu sur le tampon absorbant et jetez
l'ampoule vide.
NutriDisks
Destiné à usage unique, un NutriDisk se
compose d'une boîte de pétri plastique stérile
avec un tampon absorbant imbibé de milieu
de culture déshydraté. Celui-ci est réhydraté
à l'aide d'eau distillée stérile avant usage en
analyse microbiologique.
Les NutriDisks sont disponibles dans
différentes variétés pour l'analyse d'un large
éventail de micro-organismes.
Préparation
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