Leica SP8 Mode D'emploi
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Plateau technique
d'imagerie cellulaire
d'Infinity-Purpan
Mars 2013
Mise à jour : Mars 2021
Mode d'emploi
Microscope Confocal Leica SP8
Plateau technique d'imagerie cellulaire d'Infinity-Purpan
– Simon Lachambre –
Sophie Allart -
sophie.allart@inserm.fr
simon.lachambre@inserm.fr
Tél : 05. 62. 74. 45. 78
05. 31. 54. 79. 01

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Manuels Connexes pour Leica SP8

Sommaire des Matières pour Leica SP8

  • Page 1 Plateau technique d'imagerie cellulaire d’Infinity-Purpan Mars 2013 Mise à jour : Mars 2021 Mode d'emploi Microscope Confocal Leica SP8 Plateau technique d’imagerie cellulaire d’Infinity-Purpan – Simon Lachambre – Sophie Allart - sophie.allart@inserm.fr simon.lachambre@inserm.fr Tél : 05. 62. 74. 45. 78...

  • Page 2: Table Des Matières

    Tiles Scan Mark end Find Pour faire de la mosaïque Fin de manip Sauvegarde Extinction du système Récapitulatif des séquences d’utilisation du SP8 Plateau technique d’imagerie cellulaire d’Infinity-Purpan – Simon Lachambre – Sophie Allart - sophie.allart@inserm.fr simon.lachambre@inserm.fr Tél : 05. 62. 74. 45. 78...

  • Page 3: Allumage Du Système

    2. Fonctionnement du Statif 2.1 Observation des échantillons aux oculaires Trois objectifs sont présents sur le SP8: un 20X à sec (ON 0,5), un 40X à immersion à huile (ON 1,3) et un 63X à immersion à huile (ON 1,4). Choisir l'un ou l'autre via le logiciel.

  • Page 4: Contrôles Manuels

    2.2 Contrôles manuels Pour pouvoir voir en transmission, appuyez sur le bouton TL/RL (3) à gauche du statif. L'intensité lumineuse peut être réglée (2), ainsi que l'ouverture du diaphragme d'ouverture (1) et du diaphragme de champ (4). Vis micrométrique (5). Pour vous déplacer en x, y et z, utilisez le joystick.

  • Page 5: Présentation Du Software

    Présentation du software L'interface du programme LasX se divise en deux parties principales : - A: Réglages des paramètres d'acquisition - B: Affichage de l'image 3.1 Présentation du menu Acquisition A. Différents modes d’acquisition peuvent y être choisis (XYZ, XYT, XYλ…).

  • Page 6: Régler Les Paramètres Pour L'acquisition

    canal à la fois. 3.3 Régler les paramètres pour l'acquisition Allez dans Acquisition Mode. Taille de l'image : Choisissez la taille de votre image dans Format (classiquement on fait du 512 x 512 pixels). En cliquant sur le bouton Optimize xy format, on obtient la dimension en pixels idéale de l'image. Il ne sert à...

  • Page 7: Comparaison D'intensité

    3.4.3 Comparaison d’intensité Si vous souhaitez faire une étude d'intensité sur vos images, faites d'abord vos réglages (laser, gain) sur l'échantillon le plus brillant et gardez ces paramètres pour acquérir les images suivantes. Ainsi, les autres échantillons ne seront pas saturés. De même, les améliorations d'images (contraste par exemple) doivent d'abord être faites sur l'image la plus brillante puis appliquer de la même manière sur les autres images.

  • Page 8: Acquérir Une Pile D'images En Z

    379 nm 120nm Taille pixel (512x512) Zoom=3 90 nm Taille pixel (512x512) Zoom=4 Taille pixel 189 nm (512x512) Zoom=6 568 nm 180 nm Taille pixel (1024x1024) Zoom=1 284 nm 90 nm Taille pixel (1024x1024) Zoom=2 189 nm 60 nm Taille pixel (1024x1024) Zoom=3...

  • Page 9: Z-Compensation

    6.1 Z-Compensation Cette fonction de compensation peut être utilisée lors d’une acquisition d’un Z-Stack pour compenser variations brillance dans l’épaisseur l’échantillon. Ceci peut se faire de 2 façons : - via l’intensité du laser (AOTF/EOM Gain/ MP Attenuation) - via le Detector Gain Ces méthodes peuvent être combinées l’une avec l’autre.

  • Page 10: Seq 3/4 Canaux

    Nota Bene : Dans le mode « Between Lines sequential scan mode », la compensation peut uniquement se faire en utilisant AOTF/EOM Gain. Il est préférable d’utiliser la séquence « Between Stack ». 5) - Une fenêtre informe l’utilisateur que le mode de réglage de la Z-compensation est valide pour toutes les séquences.

  • Page 11: Tiles Scan

    9. - Suivre la même procédure pour les séquences supplémentaires. 10. - Une fois tous les réglages faits, cliquer START pour commencer l’acquisition séquentielle du Z-stack avec la compensation linéaire. 7. Tiles Scan Il faut initialiser la platine au démarrage du logiciel LAS X pour pouvoir activer les icônes.

  • Page 12: Fin De Manip

    » qui se trouve sur le bureau : >>> CPTP N° équipe. Toute image acquise sur le SP8 doit être sauvegardée en format .lif afin de conserver les méta données. Vous pouvez ensuite sauvegarder en .tif mais pas en Jpeg (qui compresse donc perd des informations).

  • Page 13: Récapitulatif Des Séquences D'utilisation Du Sp8

    Si un problème se produit, remplir les fiches « anomalie » présentes à côté de l'ordinateur et signaler le problème à un responsable. 9. Récapitulatif des séquences d’utilisation du SP8 Allumer le système : Eteindre PC (pas forcément nécessaire), puis allumer selon la séquence: 1) lampe fluo, 2) contrôleur, 3) banc lasers, 4) allumer PC, 5) ouvrir le...

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