Publicité
Ainsi au sein de l'analyseur, la mesure s'effectue de la manière suivante :
Tout d'abord, la lyse (LD Lyse) permet d'éliminer les globules rouges et les plaquettes alors
que les globules blancs ont seulement leur membrane perforée. Les acides nucléiques
présents dans le noyau des globules blancs sont marqués par la substance fluorescente qui a
pénétré à travers la membrane perforée. En raison de la différence de quantité en acide
nucléique dans les sous-populations de globules blancs, le volume de colorant fluorescent se
fixant dans les noyaux est variable. A travers le diluant, les cellules cheminent dans les
tubulures de l'analyseur jusqu'à atteindre le faisceau laser. Ce dernier sera dévié par chaque
cellule le traversant dans des directions différentes en fonction des caractéristiques cellulaires
: la diffusion vers l'avant reflète la taille de la cellule, la diffusion latérale reflète la granularité
intracellulaire et l'intensité du signal fluorescent reflète le degré de coloration de la cellule. En
détectant la différence du signal lumineux reçu dans les trois dimensions, l'analyseur
différencie les sous-populations de globules blancs (lymphocytes, monocytes, neutrophiles,
éosinophiles et basophiles) et fournit des indicateurs pour les cellules dites anormales :
lymphocytes atypiques, band cells et érythroblastes.
3.3 Mesure de la concentration en hémoglobine
3.3.1 Méthode photométrique
Pendant qu'une partie de l'échantillon est distribué dans le canal de mesure des globules
blancs (décrit ci-dessus) une autre partie est livrée au canal de mesure de l'hémoglobine. Le
sang est ici mélangé au liquide de lyse (LH Lyse) ce qui convertit l'hémoglobine en un
complexe chimique coloré mesurable. Une LED montée sur un côté du canal de mesure émet
un faisceau de lumière monochromatique dont la longueur d'onde centrale est de 530 nm. La
lumière traverse le complexe nouvellement formé et la lumière transmise est ensuite mesurée
par un capteur optique monté sur le côté opposé. Le signal est ensuite amplifié puis la tension
est mesurée et comparée à la tension à blanc (lectures prises lorsqu'il n'y a que du diluant
dans le canal). La concentration en hémoglobine est alors mesurée et calculée
automatiquement dans l'analyseur.
3.3.2 Formule de calcul
La concentration en hémoglobine est calculée selon l'équation suivante et exprimé en g/dL :
HGB (g/dL) = Constante × log 10 (tension à blanc/tension de l'échantillon).
3.4 Mesure du nombre de globules rouges, de réticulocytes et de plaquettes
3.4.1 Variation d'impédance en flux laminaire : globules rouges et plaquettes
Les globules rouges et les plaquettes sont comptés selon la méthode de variation d'impédance
en flux laminaire. Cette méthode est basée sur la mesure de la résistance électrique produite
par une particule (ici une cellule sanguine) en suspension dans un diluant conducteur. Une
paire d'électrodes est immergée dans le diluant des deux côtés d'une fente au travers de
laquelle les cellules passent l'une après l'autre. Lorsque chaque particule traverse l'ouverture,
un changement transitoire de la résistance électrique entre les électrodes se produit. Ce
changement produit une impulsion électrique mesurable. Le nombre d'impulsions générées
Vers.: 20232411FRA
Page 23
Publicité
