3M MDA2LMO96 Mode D'emploi page 61

7. Revise y confirme la corrida configurada en el Software de Detección Molecular 3M.
8. Haga clic en el botón de inicio del software y seleccione el equipo que usará. La tapa del equipo seleccionado se abrirá
automáticamente.
9. Coloque la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular 3M en el Equipo de Detección Molecular
3M y cierre la tapa para comenzar con el ensayo. Obtendrá los resultados al cabo de 75 minutos, aunque los positivos
pueden detectarse antes.
10. Una vez terminado el ensayo, retire la Bandeja de Carga Rápida para el Sistema de Detección Molecular 3M del
Equipo de Detección Molecular 3M y deseche los tubos embebiéndolos en una solución de cloro de uso doméstico
del 1 % al 5 % (v:v en agua) durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.
AVISO: Para minimizar el riesgo de falsos positivos a causa de contaminación cruzada, nunca abra tubos de reactivo que
contengan ADN amplificado. Esto incluye tubos de Control de Reactivos, reactivos y control de matriz. Siempre deseche
los tubos de reactivo sellados embebiéndolos en una solución de cloro de uso doméstico del 1 % al 5 % (v:v en agua)
durante 1 hora y lejos del área en que se prepara el ensayo.
Resultados e interpretación
Un algoritmo interpreta la curva de producción de luz que se obtiene de la detección de ácido nucleico amplificado.
El software analiza automáticamente los resultados y los expresa en color según el resultado. Los resultados Positivo o
Negativo se determinan mediante el análisis de una cantidad de parámetros característicos de la curva. Los resultados
presuntivos positivos se informan en tiempo real, mientras que los resultados Negativo e Inspeccionar se muestran una vez
terminado el análisis.
Las muestras con resultados presuntivos positivos deben ser confirmadas de acuerdo con los procedimientos de operación
estándares del laboratorio o mediante la confirmación del método de referencia apropiado
transferencia del enriquecimiento primario al caldo de enriquecimiento secundario (si se aplica), seguido del subsiguiente
sembrado en placa y la confirmación de cepas, utilizando métodos serológicos y bioquímicos apropiados.
En el contexto de la VALIDACIÓN NF, todas las muestras identificadas como positivas por el Ensayo de Detección
Molecular 2 para Listeria monocytogenes 3M deben confirmarse mediante una de las siguientes pruebas:
Opción 1: Uso de la norma ISO 11290
Opción 2: Implementación de un método de confirmación que conste de lo siguiente: Transferencia de 0,1 ml del Caldo
Demi-Fraser. Estriar directamente sobre el agar según Ottaviani Agosti descrito en ISO 11290
Opción 3: Uso de sondas de ácido nucleico como se describe en la norma EN ISO 7218
de agar selectivo (consultar opciones 1 o 2).
Opción 4: Uso de cualquier otro método de VALIDACIÓN NF certificado, cuyo principio debe ser diferente del Ensayo de
Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes 3M. Se debe usar el protocolo completo que se describe para este
segundo método validado. Todos los pasos anteriores al inicio de la confirmación deben ser comunes a ambos métodos.
En el caso de obtenerse resultados discordantes (presuntivos positivos con el método alternativo, no confirmados por
uno de los medios que se describen arriba) el laboratorio debe seguir los pasos necesarios para garantizar la validez del
resultado obtenido.
NOTA: Incluso una muestra negativa no arrojará una lectura de cero, ya que los reactivos de amplificación del Ensayo de
Detección Molecular 2 para Listeria monocytogenes 3M cuentan con una unidad de luz relativa (RLU) "de fondo".
En el extraño caso de que se produjera una cantidad de luz inusual, el algoritmo lo etiquetará como "Inspeccionar".
3M recomienda al usuario repetir el ensayo para aquellas muestras etiquetadas como Inspeccionar. Si el resultado
continúa siendo Inspeccionar, proceda con la prueba de confirmación utilizando el método que usted prefiera o según lo
especifiquen las regulaciones locales
Apéndice A. Interrupción por protocolo: Almacenamiento y repetición de pruebas de lisados tratados con calor
1. Para almacenar un lisado tratado con calor, vuelva a tapar el tubo de lisis con una tapa limpia (consulte "Lisis", 4.5)
2. Almacene de 4 °C a 8 °C por hasta 72 horas.
3. Prepare una muestra almacenada para amplificación invirtiéndola 2 a 3 veces para mezclar.
a partir del enriquecimiento del Caldo Demi-Fraser
(3)
11
ES
20 µL
, realizado en colonias aisladas,
(5)
(Español)
, comenzando con la
(1, 2, 3)
.
(3)